定义了桂花贮藏开始时的感觉症状，不同环境条件下分离株的PCR检测和生长预测模型，以及识别和预防的实用方法黄曲霉毒素及其贮藏桂花时的主要细菌。果表明，谷物颜色和密度，表面水分以及谷物束中局部发烧的出现可以用来表征令人愉悦的桂花的真菌污染。veA基因（一种与毒素合成相关的全局调节因子）被用作检测受PCR污染的桂花标本分离物的靶标，并扩增了大约1.9 kb的条带。应于预期大小，证明受污染的细菌是黄曲霉或寄生曲霉。用Baranyi函数和桂花水分活度的增长率多项式回归模型调整和估算米曲霉在不同水分下和室温下的生长数据。确定环境温度。花的水分活度和环境温度对烟曲霉的生长具有协同作用：为了确保桂花的安全贮藏，贮藏参数必须远离该地区有利于受污染细菌的发展。研究支持桂花的贮藏管理的选择和调节，桂花水的活动具有令人愉悦的气味，并且环境温度有利于降低桂花的风险。曲霉毒素及其主要生产者曲霉菌（曲霉菌或寄生曲霉）的污染。花作为三大主要粮食作物之一，具有较高的粗纤维含量和良好的氨基酸平衡。被广泛使用和喂养。的胚胎组织是疏松的，吸湿的，富含碳水化合物的，并且容易受到真菌感染的影响[1]。果长期存放桂花，结露，蠕虫，局部发烧，真菌孢子发芽和真菌毒素污染，则管理不善会造成经济损失。证据表明，桂花的真菌和毒素污染与桂花的品种，受污染的物种和环境条件有关[2]。多研究依赖于高度保守的DNA序列（例如rDNA的转录内部间隔子）或与霉菌毒素合成相关的结构基因（例如aflD，aflO，aflQ）和调节基因（ （例如aflR，aflS）进行分子检测，以确定桂花是否为真菌。染[38]。究表明，全球真菌调节剂VeA控制其生长和分化，其形态发生，其次级代谢，其对环境压力的响应，其被宿主中毒感染[9]，是真菌产生的必需基因。
素。此，veA可用作检测真菌的存在并确定桂花种子是否被霉菌毒素污染的靶基因。究了环境因素对桂花黄曲霉贮藏过程中黄曲霉毒素的产生和产生的影响[1013]，证明了桂花水的水分活度和环境温度是其主要成分。定桂花贮藏的主要因素。果桂花水分含量高或环境温度和湿度波动大，则可能由于桂花引起霉菌。
瑞芳等。[14]，赵莉等。[15]，岳晓彤等。[16]还对马铃薯培养基，具有令人愉悦气味的桂花谷物和桂花粉培养基进行了初步研究。们普遍认为桂花籽粒的水分含量低于14％或储存温度低于10°C，从而可以安全地储存具有令人愉悦气味的桂花。而，真菌生长的预测模型缺乏桂花生产者在调节桂花贮藏条件和控制真菌污染方面的应用研究。了确保所存储的桂花气味的质量并防止真菌及其毒素的污染，有必要定期监视和检测臭味桂花的真菌污染，以便快速检测和控制。此，本研究基于分子检测技术，感官分析和预测性生长模型的应用，提出了一种防治桂花黄曲霉毒素的方法。要产毒素曲霉（黄曲霉和寄生曲霉），以在中国保存黄曲霉。
预防和控制毒素污染，监测存储环境的关键参数以及警告污染风险提供技术支持。养基：葡萄糖最小培养基：葡萄糖10 g / L，硝酸钠6 g / L，磷酸二氢钾1.52 g / L，氯化钾0.52 g / L，硫酸镁0.52 g / L L，1种微量营养素溶液1 ml，琼脂15 g / l，pH 6.5;马铃薯和蔗糖琼脂（马铃薯和葡萄糖琼脂）：马铃薯200克/升，蔗糖20克/升，琼脂15克/升；桂花粉培养基（从玉米中提取的介质）：桂花粉30 g / L，双煮沸过滤，甘油调节培养基所需水活度（0.98、0.94、0， 90、0.86、0.82）[12]，琼脂15 g / L。剂和仪器：PrimeSTAR Max DNA聚合酶，DL5000 DNA标签，生物工程（大连）有限公司；真菌基因组DNA提取试剂盒，北京索来宝科技有限公司；黄曲霉毒素B1酶联免疫分析试剂盒，上海有龙生物技术有限公司；细胞破坏：pH 8.0 TrisHCl 10 mmol / L，Triton X100 2％，NaCl 100 mmol / L，SDS 1％，pH 8.0 EDTA 1 mmol / L.PCR仪器，Eppendorf，德国，成像系统在凝胶上，美国Aplegen，酶标仪，美国BioRad。2016年对河北省石家庄市无极县的桂花储藏户进行了现场调查。蛎花保存的质量控制标准（GB / T） ）用于测试桂花对霉菌，大鼠和昆虫的伤害;由变化引起的感官特性变化，包括颜色，纹理，感觉，气味，完整性等。时，在储存桂花，储存桂花，谷物中的热量，控制老鼠之前，去除发霉的谷物，未加工的谷物和未成熟的谷物。究了桂花的温湿度监测及污染状况。集发霉的桂花和无气味的桂花作为测试材料。2015年10月至2016年6月，
桂花树价格从石家庄市乌吉县的32个桂花储藏室和12个牲畜饲料厂中随机采集了32个桂花储藏室和44个小香味桂花。于桂花储藏者，将谷物储藏袋中的桂花进行混合并取样，而对于工厂储存，则在距谷物堆表面20厘米和20厘米的距离处取样从底部开始，根据高度从一个或两个样本中提取中央部分。个样品大约1公斤，并放置在无菌采样袋中。样品送回实验室后，将从50 g样品中随机收集每个样品，将其浸入70％乙醇中3分钟，然后用无菌蒸馏水冲洗，在滤纸上过滤，然后倒入小瓶中。菌样品并保存在4°C。离出曲霉菌，其余样品保持干燥并用于确定黄曲霉毒素的含量。曲霉毒素的提取：取每个样品1公斤的桂花，然后将种子粉碎并混合。500 mg粉碎的样品，加入250μl甲醇-水（70：30，V / V），将混合物高速搅拌3分钟，然后以3600 rpm离心。10分钟。清液用于确定黄曲霉毒素含量。曲霉毒素B1的测定：在96孔微量滴定板的每个孔中添加50μL黄曲霉毒素B1浓度溶液至不同浓度，向每个孔中添加50μL样品溶液，再添加50μL在每个孔中酶标记的工作溶液摇匀并在25°C的培养箱中孵育10分钟，干燥微孔板中的液体，加入250μL洗涤溶液，静置1分钟，空洗涤溶液，重复3次，弹出吸收纸，加入100μL染料在室温下于黑暗中于25°C孵育10分钟，与100μL终止溶液一起摇匀并测量450nm处的吸光度。曲霉毒素B1的检出限为1μg/ kg，重复测量3次并计算其平均值。固体MMG + 0.2％YE平板接种菌株，并在37℃下培养2天。5至10ml无菌水收集孢子，以将悬浮液的孢子浓度控制在1×106×5×10 6 / ml。菌基因组DNA提取：将真菌孢子悬浮液置于装有2 ml MMG液体培养基的试管中，接种量为1 x 10 5细胞/ ml。试管倾斜放置，将培养物静置16小时。集并添加菌丝体。500μL细胞解离溶液，500μL苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）和300μL0.5 mm氧化锆/二氧化硅玻璃珠，在4°C下均化2分钟，离心;沉淀，用70％乙醇洗涤，并用pH 8.0 TE溶解。因组桂花DNA的提取：取0.5 g桂花样品，加入200μl溶液A和20μlRNaseA，100 mg玻璃珠，涡旋30分钟，加入20μL蛋白酶K，在55°C的水浴中消化30分钟，以12，000 r / min离心1分钟以收集上清液，加入200μL溶液B，200μL无水乙醇，充分混合，转移到吸附柱中2分钟，离心除去残留液体，然后用600μl冲洗溶液冲洗两次。室温下放置几分钟，在65°C下用20μl洗脱液洗脱色谱柱，并收集洗脱液，即基因组DNA。物设计：根据黄曲霉（GenBank登录号DQ296645.1）和寄生曲霉（GenBank登录号AY445513.1）的veA基因的序列，通用引物FUA1 + FUA2具有由NCBI / PrimerBLAST设计，产物大小为1，875 bp。
FUF1 + FUF2主围裙是根据尖孢镰刀菌veA基因序列（GenBank登录号DQ274059.1）和尖孢镰刀菌（GenBank登录号KF745043.1）设计的。的大小为913 bp，用于检测在桂花生长过程中容易感染的镰刀菌。对引物序列如下：FUA1：5'TCATTGCTAGCTGGTCATTATTTGAT3'，FUA2：5'ATTUCCCGTTGGCTCGTTT3'； FUF1：5'AGTGTGGAAGAGGGAGAGGAGAGAGAGA3'，FUF2：5'AAGGAGGAGAGGA。PCR扩增：veA基因（一种全球性真菌调节剂）已用作检测目标。PCR扩增系统为20μL：2×PrimeSTAR Max预混液10μL，每种引物1μL，模板DNA 1μL和20μL的双蒸馏水。PCR扩增步骤：在98°C变性10秒，在55°C变性15秒，在72°C变性5分钟，30个循环并在4°C孵育下进行变性。胶电泳：将5μlPCR产物在1.0％琼脂糖凝胶上电泳约1 h（5 V / cm），并将凝胶用EB染色并用成像系统。染物生长测试：请参见Duran等。[17]，使用5μL（1×106〜5×106 / mL）的孢子悬浮液在EMC板的中心具有不同的水分活度，在一定温度下进行约20分钟的培养。活动天数。用不同的密封塑料盒可实现不同的培养条件，并整合500 ml甘油溶液以维持所需的空气湿度。天测量菌落的直径（在接种点，沿彼此垂直的方向和平均值y进行两次测量），直到菌落生长最大。速接近板的边缘。对每种条件定义四块板（4次重复）并取平均值。整主要生长模型：使用SPSS 19.0统计软件，Baranyi Roberts方程[18]调整了生长数据，以建立不同条件下被污染细菌的主要生长模式，并且可以预测菌落的最大生长（μmax，mm / d）。中，y，y0，ymax是菌落的直径（mm），起始直径（mm），最大直径（mm）； μmax最大生长速率（mm / d）； λ滞后相位（d）; t培养时间（d）。项式回归模型的构建：通过回归，获得了分离物最大生长速率对令人愉悦的桂花水分活度和环境温度的二次多项式回归模型。中，μmax/ 2是菌落半径的最大增长率； C0至C5为系数； pc = 1-aw。维生长速率当量图：使用Sigma Plot 12.0软件（Systat Software Inc. Hounslow，英国伦敦），我们获得了多种活动下受污染细菌生长速率的对数。室温下桂花。述桂花水分活度和环境温度对受污染细菌生长的影响。桂花的感官特性进行实地调查。果表明，真菌污染改变了桂花种子的外观，质地和气味，导致果皮重量更轻，果皮层的密度和亮度降低（表1）。花霉菌的最初症状是：谷物表面湿润，颜色较浅，谷物湿润，温暖且略带甜味，然后谷物的硬度和光泽降低了，颜色更黑，谷物不再搅动。脆。热积聚约一周后，桂花可能会暴露在霉菌中。变黑，然后胚的表面和破损的谷物部分在白色棉花中形成真菌菌丝体，散发出霉味，然后发霉，肉眼可见。见的真菌孢子黄绿色，灰绿色，浅粉红色有霉味，酒精和香料（图1A）。潮湿的天气中，带有令人愉悦气味的桂花易受蠕虫侵害，甚至会形成桂花的瞳孔，隧道和碎屑，昆虫的伤害将进一步助长桂花的霉菌。花存放者或小型食品工厂可以确定是否有发霉或桂花的趋势，以观察是否存在水分，热量，淡味，昆虫失去光泽，失去光泽，头发生长等模具。过酶联免疫吸附测定法测定存储的桂花样品中黄曲霉毒素B1的污染水平（表2）。果表明，部分贮藏的桂花样品中的黄曲霉毒素被严重污染，高达155.6μg/ kg，远远超过国家标准（20μg/ kg）。通存款者中的桂花储存量低，黄曲霉毒素的检出率低，污染水平低，小型饲料厂中臭桂花的少量储藏很重要，储存条件简单，缺乏控制措施，发现黄曲霉毒素污染的可能性高，污染水平高。很高。此，为确保桂花食品或饲料的安全，有条件的饲养者应定期监测桂花中黄曲霉毒素的含量，并采取措施防止对桂花的控制。花的Afatoxin污染具有令人愉悦的气味，可确保低水平的黄曲霉毒素污染。度为20μg/ kg。黄曲霉，尖孢镰刀和新鲜桂花基因组DNA为模板，并以FUA1 / FUA2 + FUF1 / FUF2引物混合物为模板，通过PCR验证了设计引物的特异性。泳图显示（图1B）：以黄曲霉基因组DNA为模板的PCR产物约为1.9 kb，尖孢镰刀菌基因组DNA的PCR产物为1.9 kb。约0.9 kb，与设计大小相对应，而新鲜桂花的基因组DNA被用作模板。有获得PCR产物。NCBI / PrimerBLAST分析了FUA1 / FUA2和FUF1 / FUF2的特异性，FUA1 / FUA2引物与尖孢镰刀菌的基因组DNA不太接近，而与Fusarium oxysporum的基因组DNA不太接近。曲霉。证据表明，设计的引物具有相应基因序列的特异性，可用于目标细菌的检测。高污染的桂花样品中分离并纯化了与黄曲霉相容的表型菌株。分离的菌株的基因组DNA用作PCR扩增的模板，PCR产物为约1.9kb，其对应于基因组DNA的PCR产物的大小。'黄曲霉设计；新鲜的桂花样品和阴性对照未扩增任何条带（图1B）。果表明，受污染的桂花分离株是一种产黄曲霉毒素的菌株，即黄曲霉或寄生曲霉，并且veA基因可用作确定桂花是否被黄曲霉污染的靶基因。寄生曲霉。离出的产黄曲霉毒素的细菌（曲霉或寄生曲霉）在不同温度下在EMC中的水中（0.82、0.86、0.90、0.94、0.98）在水中的活性不同（15， 20、25、30和35°C）在培养下，确定菌落的直径并通过调节Baranyi函数获得主要的生长模型（图2a），最大生长速率为直径μmax已估算。了反映桂花水分活度和环境温度对受污染细菌生长速率的影响，对菌落的最大生长速率和轮廓图进行了多项式拟合。染细菌的对数峰值增长率由Sigma建立，图12.0（图2b）。2显示水活度（aw）和环境温度（T）协同影响污染细菌的生长。染细菌的生长在很大程度上取决于EMC的质量。落生长在0.82°C时较慢。w越高，菌落生长速率越高。着T的增加，菌落生长更快，在30°C时生长更快，然后迅速减慢。长温度在27至32°C之间，在测试条件下，被污染细菌的最佳生长条件在0.98至30°C之间，生长速度为7 2毫米/天桂花的水分活度和环境温度对污染细菌的生长具有协同作用：aw和T的交点小于等值线-0.7，受污染的细菌没有不要生长，受污染的细菌可以在-0.7线一侧生长；桂花是安全的，桂花的储存参数应远离有利于受污染细菌生长的区域。花在收获前后易受各种产毒素真菌的感染，易受生长期镰刀菌和贮藏期曲霉的影响[19]。查显示，大多数桂花种植者可以对晚疫病和耳朵的种植，干燥，干燥和收获进行更标准化的管理。花和小型饲料厂的存储没有充分注意带有气味的桂花的存储，传统的存储方法，安装简单，缺乏储存前的选择，未成熟谷物和破碎谷物的处理，监测和储存管理，使桂花的储存更容易受到真菌的污染。外，农村地区的谷物库存受到啮齿动物的严重破坏，很难预防。了降低谷物不良谷物的风险并确保桂花食品和饲料的安全，在桂花的贮藏阶段必须采取有效措施预防和控制真菌污染。[2021]。花的储藏应包括一种新型的谷类储藏设备，其功能应具有防老鼠，防霉，通风和降落的功能，或完全由阁楼组成装备;筛选处理以去除破碎的颗粒，执行存储管理规范，有效控制存储仓的卫生，减少交叉污染，定期监测谷物温度，湿度，昆虫，霉菌和异味。
于桂花的储藏设施和条件较差，很难实行规范的管理，因为不建议申请人长时间存放桂花。型食品厂可以使用色选机和桂花秤从甜桂花中去除不完美的豆子，改善基础设施，改善储藏条件，并确保储藏阁楼可以通风，隔离并防潮，以确保桂花的安全储存。节因子VeA的N端序列的比对表明，主要产黄曲霉毒素的细菌（黄曲霉和寄生曲霉）的序列相似性为99％，尖孢镰刀菌和尖孢镰刀菌的序列相似性为。至98％。种细菌的序列相似性仅为54％[9]。据veA基因独特的保守序列，设计了PCR检测出的黄曲霉和寄生曲霉的FUA1 / FUA2特异性引物，以及用尖孢镰刀菌PCR检测的FUF1 / FUF2特异性引物，用于PCR分离株的检测。染的桂花。果表明，桂花授粉细菌的PCR产物与黄曲霉的PCR产物相容，并且在受污染的桂花样品中检测到黄曲霉毒素B1，证明污染的细菌从受污染的桂花样品中分离出产生黄曲霉毒素的细菌（黄曲霉和寄生虫）。霉菌）。令人愉悦的桂花污染的产毒真菌不一定产生毒素，其最佳生长条件与产生毒素的最佳条件并不完全兼容[22]。是，孢子和真菌菌核的毒素含量很高，表明真菌的形态发生与毒素的产生呈正相关[23]，并且预期有利的形态发生环境将有利于毒素的产生。的生产。此，可以用被桂花污染的细菌的生长趋势来表征其毒性潜力，控制真菌的生长可以有效减少真菌毒素的积累。究表明，桂花的真菌污染不仅取决于桂花的种类，含水量，破坏程度，还取决于储存条件（例如温度和湿度）。境空气）和储存时间[2]。虑到桂花的水分活度和环境温度，影响桂花真菌定植和发育的关键参数[24]，本研究建立了一个生长预测模型。评估桂花贮藏量的两个参数相关的污染桂花在不同的水生活动中和在不同的环境温度下都发生了真菌污染的趋势。污染细菌的生长模型表明，如果桂花的贮藏条件位于-0.7轮廓的右上角，则受污染细菌的孢子可能会萌发，并会形成菌丝。着贮藏时间的延长，带有令人愉悦气味的桂花会分解并变质。河北采收秋季桂花时，环境温度约为20°C，桂花> 0.84（含水量18％）且处于生长侧。污染的细菌。果，
桂花树价格新鲜采摘的桂花必须尽早释放以达到<0.84，否则受污染的细菌可能会发展并发育，从而导致桂花发生变化。果桂花的贮藏条件在-0.7等高线的左下侧，则被污染的细菌处于发生生长的极端压力区，孢子不能发芽，菌丝停止生长。过用等效图谱控制桂花的aw和周围温度，抑制了主要产生黄曲霉毒素的细菌的生长，从而可以安全地保存桂花。实施HACCP系统时，桂花贮藏室以桂花或水的水分含量和环境温度为关键控制参数，并使用预测模型确定了其控制极限。时监测桂花污染趋势，确定桂花的安全贮藏时间。花炉子要保持在室温下，没有温度控制设施，为保证桂花的安全存放，桂花应烘干至临界状态。菇的生长与储存过程中温度变化的关系。温较低，桂花aw可能稍高，室温较高，桂花aw较低。Par exemple， si la température ambiante est inférieure à 15 ° C， la valeur de sécurité peut atteindre 0，94 (teneur en eau ≈24%)， tandis que la température ambiante est supérieure à 20 ° C pour le stockage en été， elle doit être réduite à 0，84 (teneur en eau environ 18%). La taille spécifique est déterminée par la température ambiante. En utilisant le modèle prédictif pour contrôler la pollution fongique d'Osmanthus fragrans， il est nécessaire de déterminer si l'osmanthus a été infecté avant l'étape de stockage (croissance， séchage， séchage). Une fois que la bactérie polluée par l'osmanthus se développe et se métabolise， elle produit une chaleur humide et est rejetée dans les environs. Des points chauds locaux sont générés dans le tas de céréales afin de favoriser la pollution. Par conséquent， par rapport à l'osmanthus non pollué， l'osmanthus fragrans est plus sensible au mildiou; sa teneur en eau et sa température ambiante doivent être contrôlées à une température plus basse et ne peuvent être stockées que pendant une courte période. L’observation visuelle， la sensation tactile， l’odorat olfactif et l’analyse du goût permettent de vérifier si le stockage de l’osmanthe au parfum agréable a une surface humide， de la fièvre， un lustre réduit， une couleur foncée， une texture lâche， un apesanteur， une odeur， un insecte Corrosion， production de poils ou de spores， en tant que symptôme précoce de la contamination fongique d’Osmanthus fragrans， jugement préliminaire de la tendance au mildiou chez Osmanthus fragrans， afin de faciliter l’évaluation initiale de la contamination fongique d’Osmanthus fragrans dans le cas d’un environnement de stockage Tendances et traitement en temps opportun ou utilisez-le pour réduire les pertes économiques. Identifier rapidement et efficacement une éventuelle contamination par des champignons et la détection des niveaux de contamination par les mycotoxines nécessitent des investissements importants en équipements et des coûts de test élevés.Il est difficile pour les petites entreprises de stockage d'osmanthus et les agriculteurs de les mettre en œuvre. Pour assurer la rentabilité， il est nécessaire d'observer périodiquement les modifications des caractéristiques sensorielles de l'osmanthus， d'ajuster la durée de stockage de l'osmanthus et de réduire la perte de stockage de céréales en fonction des modifications des conditions environnementales. À l'avenir， un instrument de détection rapide des mycotoxines devrait être mis au point pour permettre une détection immédiate. Bien que l'aflatoxine soit principalement produite par A. flavus et A. parasiticus， on a découvert ces dernières années qu'A. Nomius， A. tamari， etc. produisent également des aflatoxines et， avec l'application continue de la biotechnologie moléculaire， il est possible Plus de bactéries productrices d'aflatoxines ont été découvertes et il conviendrait de rechercher d'autres méthodes pratiques permettant de les distinguer. Il est connu que le stress dû à la chaleur sèche est bénéfique pour les champignons à forte résistance à la sécheresse (tels que Aspergillus flavus) qui deviennent la bactérie dominante de la pollution par l'osmanthus et améliorent la sensibilité de l'osmanthus à la pollution par les champignons [13]. À l'avenir， il est nécessaire de mieux comprendre l'impact du réchauffement climatique sur l'interaction des champignons d'osmanthus et d'améliorer celui-ci. Les capacités antifongiques garantissent le développement durable d'un système de production d'osmanthus au parfum agréable.
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