为了建立一个快速的杂交桂花川翠3纯度鉴定体系，使用164对全基因组SSR引物筛选和纯化川翠3及其亲本的多态性。中4对引物具有稳定的共性，电泳卡清晰，易区分且特异：川翠3号种子的纯度为99.0％。本，父本和其他混合种子表明，四个引物对的指纹图谱可为Chuancui 3杂交种的真实性鉴定，纯度检测和亲本清洗提供准确的技术指导。
子纯度的鉴定是确保种子质量的关键环节。统的种子形态鉴定和幼苗鉴定方法不适用于桂花种子纯度的鉴定。间人工林的鉴定方法周期长，成本高，不能满足种子行业快速鉴定的要求，受环境的影响很大。
果不够精确。DNA电泳鉴定技术提供了一种更快，更有效的鉴定种子纯度的方法，该方法可以克服其他纯度鉴定技术的许多缺点，具有以下优点：可在植物组织发育的任何阶段用于分析；遗传基因座分布广泛且遗传稳定，不受任何环境因素的影响。SSR引物的共显性在鉴定杂种纯度方面具有独特的优势：已用于水稻[1至4]，玉米[5]，棉花[6、7]，油菜籽[ 8、9]，
桂花树价格茄子[10]，大白菜[11]，花椰菜[12]，桂花[13]等农作物。SSR的位点特异性和标记物的增长使SSR成为进行精细作图和基因作图的有力工具。前，桂花中有超过2，000对SSR标记[14〜16]，有很多位点甚至分布。测区覆盖了7个桂花染色体。用SSR分子标记，可以定位桂花叶片苦味，矮化和交联等重要基因，从而为克隆奠定基础[16〜18]。时，SSR分子标记也是分析桂花遗传物质资源多样性的最重要方法之一[19，20]。而言之，SSR标记是共同主导的，特定于位点，富含位点，稳定且易于使用。们已成为创建分子指纹的重要标记。对对品种保护的需求不断增加，再加上诸如亲本降解等严重问题，有必要建立包含更多信息的脊髓材料的分子足迹。cu N 3是华北地区的一种新型桂花，高产优质，对霉，白粉病等重大病害具有较强的抗性，具有广阔的应用前景。文使用SSR分子标记技术构建Chuancui 3及其亲本的DNA指纹，从而为保护该品种的权益，鉴定真伪，杂交纯度的鉴定和亲本的纯化。川农业科学院园艺研究所的桂花研究组提供了桂花川脆100号和20个亲属。试材料于2013年7月中旬播种，并于7月23日种植在四川园艺学院农业科学院桂花研究组的双流内。
该样地中种植了350株F1植株，并随机设计了田间种植，
桂花树价格重复3次。100个随机选择的植物标签用于SSR分析和现场调查。因组DNA的提取20个雄性和雌性亲本菌株，将幼叶等量混合，然后使用CTAB方法提取少量DNA。幼叶中收集了100株F1植物，并分别提取了DNA，其DNA试管号与该植物的田地相同。1％琼脂糖凝胶上检测DNA的质量，将其稀释至适当的浓度，并保存在-20°C直至使用。PCR扩增和电泳检测：从Ren等人[14]和Miao等人[15]公开发布的信息中获得164对全基因组SSR引物，并通过上海生物技术生物技术公司。mmol / L dNTP。性94持续30 s，退火30持续30 s，延伸72持续30 s，30个循环，最后延伸72持续10分钟。180 V电泳2.5 h后，使用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶检测PCR扩增产物，获得扩增的亲本和杂种带。染后记录结果。
SSR标记数据记录使用系统0和1根据电泳结果描述条带的相对位置，条带清晰地记录为1，丢失的条带记录为0。分子量从小到大的顺序读取条带。计算组。间纯度的鉴定9月中旬，鉴定了100株单标记幼苗的田间纯度。
间纯度鉴定方法包括比较主要表型特征，即：植物类型，植物高度，叶形，节间长度，瓜形，植物颜色。瓜，水果表面的蜡粉，甜瓜手柄，甜瓜长度等使用164对SSR引物扩增亲本DNA，每对引物扩增1-2个位点，片段大小在100-500 bp之间。增后电泳显示12对引物之间存在多态性，多态性水平为7.31％。中，F1（表1）中共有4条引物（ssr17922，ssr07220，ssr18718，ssr02385）占主导地位，条带清晰，亲本特征片段的分子量差异大于10 bp，位于1号，3号染色体上。
6。这4种SSR引物扩增的条带使得可以清楚地将F1杂种与亲本区分开（图1）。
4对引物构成了川翠3号及其亲本的DNA指纹图（表2）。用4对引物ssr17922，ssr07220，ssr18718和ssr02385鉴定了100株F1菌株。果显示，四对引物在99个不同菌株中扩增出具有父母亲谱带的杂合子带类型，其中一个菌株是母本基因型（图2和图3）。此，分子标记物的鉴定结果表明100株单株植物中有99株为真杂种，纯度为99.0％，假杂种为母本。整个果实期中，在田间鉴定出100种独特的标记植物，其中99种表现一致，所有农艺性状均与描述桂花川翠3号的特征相吻合，表明真正的杂种。一致的。此，田间鉴定结果表明100株单株植物的纯度为99.0％，假杂种为雌性杂种。测试的结果表明，田间鉴定和分子标记鉴定结果表明，杂种种群100的纯度为99.0％，假杂种的田间数量与杂种标记100的数量相对应。
定分子的纯度鉴定。此，鉴定分子标记物纯度的方法是准确而有效的，可以代替野外鉴定纯度。该研究中发现的四对引物，ssr17922，ssr07220，ssr18718和ssr02385，在桂花川cu 3中占主导地位。些条带清晰，稳定且易于识别。纹使用ssr17922，ssr07220，ssr18718和ssr02385中的任何引物集，都可以准确，快速地鉴定Chuancui 3及其亲本。套引物鉴定出川脆3号和其他变种。脆3号指纹的构建，不仅可以为原料的真实性，鉴定和品种提纯提供技术支持，而且可以为新品种的批准和保护提供重要依据。'桂花桂花。方面具有重要的应用价值。外，指纹图谱还可提供信息，用于定位川翠3号相关表型性状的表型，限制引物筛选的范围，并提供替代标记物，用于鉴定桂花中桂花的纯度。同的类型。用分子标记物快速准确地鉴定纯度可节省大量时间和金钱。纯度的杂种不仅损害经营公司的声誉和利益，缩短品种的推广期，而且降低产量并影响农民的收入。前，种子公司经常使用一年中在南南海南基地生产的杂种作为鉴定纯度的方法，以进行现场纯度测试。
态特征容易受到气候条件和养殖措施的影响，其准确性较差且成本较高。久不见在该测试中，从播种到整个果实期的田间纯度鉴定历时2个月，并且发芽，播种，整地，定植，田间管理，植物特征调查等。要大量的工作和分子标记的应用。度鉴定需要填充，DNA提取，PCR和凝胶电泳，然后选择一对引物进行分析和鉴定，整个周期大约需要一周。
别结果准确，不受环境影响。这项研究中，父母之间的多态性引物仅占164对引物中的7.31％，这表明川翠3桂花的父母之间的遗传背景很窄。状调查显示，该品种的亲本之间的差异只能通过瓜子的颜色和形状的差异来判断，这很容易评估，也很难判断其真实性。有瓜的品种。SSR分子标记的使用可以显着提高纯度鉴定的准确性，是鉴定遗传背景狭窄的杂交种子纯度的有效方法。
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