[桂花树价格]桂花ZmC3H18基因的序列和表达分析

　　CCCH锌指蛋白是锌指蛋白超家族的亚家族，在植物和植物生长期间通常含有1至6个由三个半胱氨酸和组氨酸组成的基序。生物压力。者都发挥着重要的监管作用。这项研究中，我们分析了ZmC3H18 CCCH锌指蛋白基因的序列和表达。ZmC3H18蛋白含有两个CCCH结构域，系统发育树分析表明ZmC3H18与单子叶植物中同源基因的进化关系较窄。ZmC3H18基因在组织和器官中组成型表达，但生殖器官中的表达水平高于营养器官。ZmC3H18基因在气生根中的表达模式表明该基因在气生根原基萌发过程中表达最高。外，对顺式作用元件的分析表明，ZmC3H18基因的启动子区域含有顺式作用元件，其响应由于寒冷，高温和干旱引起的应激。时定量PCR分析显示ZmC3H18基因表达受非生物胁迫（冷，热，盐和干旱）的调节。些表达结果表明ZmC3H18基因在生殖生长和非生物胁迫中起重要作用。

　　
　　实验结果为桂花ZmC3H18基因的功能研究提供了重要信息。家族锌指蛋白包含数个亚家族如ERF WRKY DOF和RING指[1-4]，并且蛋白质CCCH型锌指的是亚家族中的一个。CCCH锌指蛋白通常含有1至6个由三个半胱氨酸和组氨酸组成的基序[5，6]，通过识别和结合RNA发挥生物学功能，而其他类型锌指蛋白质通过与DNA或蛋白质结合起作用[7]。CCCH锌指蛋白在植物生长和非生物胁迫中起重要的调节作用。

　　如，拟南芥中的HUA1通过识别结合RNA参与花发育的调节[8]，而AtSZF1和AtSZF2参与盐胁迫反应[9]。花含有10个属于CCCH锌指蛋白家族的基因[10]，ZmC3H18基因在气生根早期发育的测序结果中占主导地位[11]。该研究中，分析基因序列，并通过定量PCR实时检测基因在不同有机和非生物胁迫下的表达模式。些结果将为完全理解ZmC3H18基因的生物学功能提供新信息。验中使用的桂花材料是纯B73系。光照培养箱中照射材料一整天（16小时光照/ 8小时黑暗）。胁迫处理包括在4℃培养箱中处理生长两周的幼苗;热应激处理包括在40℃培养箱中处理生长2周的幼苗进行处理，盐胁迫处理为250mmol / L.生长2周的幼苗用NaCl处理;干旱胁迫处理包括用15％PEG6000处理生长两周的幼苗。0，1，3，6，12，24小时和48小时的处理后，收集处理植物的叶子用于实时定量PCR分析。生根，第二片材，全苗播种（V期间）后14天，杆25天播种（V5期）和年轻的耳朵后和播种（周期V7）为独立的材料之后流苏34天实时定量PCR分析。
　　于检测气生根中基因表达水平的材料来自V5期的四个连续节点。用SMART软件（http://smart.embl-heidelberg.de/）分析ZmC3H18蛋白的氨基酸序列。过NCBI数据库对ZmC3H18序列进行Blast比对分析，并下载来自其他物种的同源蛋白质序列。

　　用DNAMAN 7.0软件分析基因的氨基酸序列和来自其他物种的同源基因，并使用最大的自然方法构建系统发生树。
　　（ML）。用PlantCare数据库（http://bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/plantcare/html/）分析1500bp的的ZmC3H18基因的起始密码子上游的启动子区。用Trizol试剂盒提取每个样品的总RNA，并根据试剂盒说明书进行cDNA合成和纯化。实时CFX96 Bio-Rad公司（Bio-Rad公司，赫拉克勒斯，CA，USA），引物序列ZmC3H18-F，使用定量检测系统的实时定量PCR分析：5'-GACAAGAGAAGCGAGGAACC-3“和ZmC3H18-A：5'-TGAGCGAGAGGCACT-3'，18S rRNA基因作为内部参照基因。0小时的胁迫处理的基因表达水平设定为1，并且作为对照，计算其他时间的基因的相对表达水平。用SPSS 18.0软件分析测试数据的差异。用SMART软件分析ZmC3H18氨基酸序列，发现其含有两个CCCH结构域（图1A）。对ZmC3H18的氨基酸序列和13种物种的其他同源基因，发现这14种蛋白质都含有CCCH结构域（图1B）。表明CCCH保守的结构域在不同物种中是高度同源的。了理解ZmC3H18的进化关系，使用几个比对构建了系统发育树（图2）。果表明，属于同一单子叶的桂花，高粱，小米和水稻在同一分枝内会聚，远离其他双子叶植物。CCCH型锌指蛋白家族的ZmC3H18基因在气生根早期发育的测序结果中占主导地位。

　　此，我们使用实时定量PCR来鉴定四种不同桂花V5节点不同发育阶段的气生根。以参考文献[12]（图3）检测发育的形态。果表明，ZmC3H18基因在气生生根开始时表达量最高，表明ZmC3H18在气生根发生过程中起重要作用。了更好地理解基因ZmC3H18的表达模式，我们使用定量实时PCR，以检测不同组织中ZmC3H18基因的表达水平（根，茎，叶，幼苗，耳朵和流苏）桂花桂花。图4所示，在所有六个组织中检测到ZmC3H18基因的表达，但在生殖组织（阴茎和女性）的表达水平比在营养组织显著更高（根，茎，叶和植物）。表明ZmC3H18基因在桂花的繁殖发育中起着更重要的作用。了更好地理解ZmC3H18基因在应激中的作用，我们分析了ZmC3H18基因的1500bp启动子区的顺式作用元件。表1所示，除了顺式作用元件必要相关转录和光响应，八个顺式作用元件被发现，与压力有关的其中两个有关生长（GCN4_motif和SKN-1_motif），三（HSE，桂花树价格MBS和LTR）和与激素反应有关的3种元素（ABRE，TGA元素和Motif II b）。式作用ZmC3H18基因的元件含有三种与应激相关的元件。了进一步研究ZmC3H18应力基因的响应，在ZmC3H18冷胁迫条件的基因的表达由于，桂花树价格热，盐和干旱通过定量实时PCR检测（图5） 。冷胁迫处理期间，ZmC3H18基因的表达迅速下降并保持低水平。热应激处理中，ZmC3H18基因表达减少后增加，达到峰值ZmC3H18基因表达在处理1小时后略有下降，然后迅速下降并保持低水平;当干旱胁迫发生时，ZmC3H18基因的表达也迅速下降。些结果表明ZmC3H18基因参与各种应激反应。CCCH锌指蛋白是锌指超蛋白家族的亚家族，在植物生长和发育以及生物和非生物胁迫的调节中起重要作用。植物中发现的第一个CCCH锌指蛋白基因是拟南芥中的PEI1，其参与形成心脏胚胎的过程[13]。来，研究人员对各种植物的CCCH锌指蛋白进行了深入研究，如拟南芥[14]，水稻[14]和烟草[15]。据从转录气生根[11]，所述蛋白质CCCH型锌指的一个基因的早期发展数据，ZmC3H18，它主要表达于气生根的早期发展，具有两个保守的结构域由CCCH和CCCH锌指在其他植物中。
　　白质的结构非常相似。化关系分析表明，ZmC3H18与单子叶植物中CCCH锌指蛋白的进化关系更为密切。CCCH锌指蛋白基因参与多种生长和发育过程。如，华1拟南芥是参与花发育[8]，在水稻OsDOS参与叶子衰老[16]和ZmC3H18基因的调控中起着桂花中的启动中起重要作用气生根的原基。不同组织中表达的分析表明，ZmC3H18基因在营养器官上述生殖器官表示，这表明ZmC3H18基因在生殖舞台上扮演更重要的角色。CCCH锌指蛋白基因也参与生物和非生物胁迫。如，拟南芥中的AtSZF1和AtSZF2参与盐胁迫响应过程[9]。
　　冷，热，干和盐胁迫下，ZmC3H18基因的表达水平发生了不同程度的变化，表明ZmC3H18基因参与了各种非生物胁迫反应。研究结果将为系统理解ZmC3H18基因的生物学功能提供新的信息。
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