[桂花树价格]用原料乳中的茉莉花快速检测和应用guigrolan试纸

　　[目的]为了建立使用immunocolloïdale技术或用于测试条用于茉莉快速检测赤霉素的方法[方法]半抗原赤霉素用有机合成方法和其制备的蛋白质将载体缀合以获得免疫抗原，并通过人工免疫获得单克隆抗体。
　　过酶联免疫吸附测定验证了制备的单克隆抗体的性能。谱测试条桂花柠檬酸是标记有胶体金的单克隆抗体，其原理是，红霉素桂花抗原和山羊抗 - 小鼠IgG被喷射到由制造的膜使用者（硝酸纤维素），然后使用样品缓冲液和吸收垫。它们分别放在PVC板上并制作试纸。[结果]试纸检出限可达0.5~1.0μg/ kg，具有速度快，操作简便的优点。外，测试条与大多数桂花和桂花没有明显的交叉反应。[结论]试纸可用于准确测定生乳中赤霉素的添加量。油尺应该允许快速测试原料奶中的赤霉素残留物。生长过程中，赤霉菌产生次生代谢产物zeranol，它也是一种zeocin还原产物，具有相似的雌激素活性[1]。股蓝冬虫夏草影响动物的垂体和胰腺，影响甲状腺素的在体内的水平，以及生殖系统的生长发育，促进蛋白质的合成，在体内。已被用作动物，特别是牛和羊的生长促进剂，以促进动物饲料的使用并增加其体重增加率以提高经济效率。而，当牛和家禽摄入含有茉莉花的食物时，残留物会残留在其组织和体液（牛奶）中。些残留物可导致人类性激素水平失衡，影响人体健康。摄入柠檬酸麻疯酯在体内超过一定量时，可能会影响正常发育甚至癌症的第二性征[2-3]。1998年，欧盟禁止使用赤霉素等激素类药物进行牲畜和家禽饲养。2010年，中国卫生部明确禁止使用赤霉素等激素类药物作为畜禽生长因子。确保食品安全，检测动物源性食品中的茉莉花青霉素及其产品非常重要。统的赤霉素检测方法主要依靠色谱分离和酶联免疫吸附试验，主要采用薄层色谱法[1]，高效液相色谱法（HPLC）[4-5] ，通过高效液相色谱（HPLC）进行质谱分析。-MS）[6-7]和酶联免疫吸附测定方法（ELISA）[8-9]。统方法首先使用有机溶剂提取样品中的目标，然后通过预处理方法（例如萃取或免疫亲和柱）预处理样品以去除杂质。大规模仪器检测相比，酶免疫测定方法具有低检测成本并且允许同时检测多个样品。而，酶免疫测定不仅需要有经验的人员，还需要外部因素，例如提取溶液的离子强度，培养温度等，这些因素容易影响测试结果。同的样本矩阵对结果有很大影响。
　　ELISA方法相比，胶体金免疫层析法是一种更简单，更快速的检测方法[10-12]，具有实用预处理，检测效率高的优点。肉眼直接判断结果。于胶体金色谱的原理，即抗原与抗体之间的竞争反应，作者开发了一种检测鲜奶中赤霉素残留的方法。LC-MSQDESI液相色谱仪（AB4000 +）;型IKA RV10旋转蒸发仪（广州爱卡）;电加热搅拌器IKA basic（广州爱卡）;氯金酸;桂花黄芩等;乙酸叔丁酯;牛血清白蛋白（BSA）; 1-乙基 - （3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐（EDC，Anne）;弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂（Sigma，USA）;有机试剂如吡啶，N，N-二甲基甲酰胺（DMF），氯仿，二氯甲烷，三氟乙酸，国药化学试剂有限公司半抗原合成的过程如图1所示。确称量0.16g柠檬酸茉莉，加入0.5g碳酸钾和10ml DMF，在50℃下反应10分钟。

　　后加入0.2g溴乙酸叔丁酯。完后，反应在12℃下进行。发溶剂至干，加入水，乙酸乙酯为乙酸乙酯。基。机相用无水硫酸钠干燥并蒸发至干。溶解的中间体溶于10ml二氯甲烷中，缓慢滴加5ml。5ml三氟乙酸反应2小时，蒸发溶剂至干，再次加入水，用乙酸乙酯萃取，蒸发溶剂，得到桂花皂苷。取15毫克半抗原柠檬酸桂花，溶解在2mL的DMF中，加入36毫克N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），34毫克EDC-HCl中，在3体积溶解32毫克BSA加入2mL 0.1mol / l L-硼酸缓冲液（pH9.0），1mL DMF，在室温下使0.5mL上述溶液反应过夜，用PBS透析2至3天，离心，分配并冷冻。据人工抗原免疫，将健康雌性BALB / c小鼠免疫42至56天。体步骤如下：第一次免疫是通过用完全弗氏佐剂乳化50μg人工抗原进行的，第二次，第三次和第四次免疫用不完全佐剂乳化，治疗间隔是14天。后一次免疫3天后，在无菌室中取出小鼠脾细胞，并通过使用聚乙二醇（PEG）的方法与SP2 / 0骨髓瘤细胞（5：1比例）融合。养融合细胞后，通过间接竞争ELISA选择单克隆抗体细胞系，桂花树价格并将所得细胞用于诱导小鼠腹水产生，最后加入饱和硫酸铵溶液。过沉淀和纯化获得黄芩皂苷。隆抗体。纯化的单克隆抗体包被在酶联免疫板上，并通过ELISA方法测量单克隆抗体的性能。据柠檬酸三钠法制备胶体金（直径约40nm）。备方法：安装烧瓶，球形冷凝器，加热夹套和冷凝水作为回流装置，然后将50.0ml 0.01质量％氯金酸溶液置于烧瓶中然后加热至沸腾，然后迅速加入1％的质量分数。0.50ml柠檬酸三钠溶液，直至反应完成，溶液颜色保持稳定。续加热10分钟，冷却并冷却后再使用。备胶体金参考抗体探针的方法根据文献[9]进行，即通过在250mL烧杯中制备适当量的胶体金溶液。0.1mol / L K2CO3溶液调节胶体金溶液的pH值。水溶解在1/10胶体金体积中，滴加胶体金溶液，搅拌反应0.5小时，抗体标记浓度分别为0.5，1.0，2.0μg/ mL，然后是1/10的胶体金。10％BSA浓度下滴加体积，继续搅拌0.5小时，然后根据体积1/10逐滴加入1％聚乙二醇（PEG 20000）。体金。拌0.5小时后，在9000℃下高速离心，每分钟0.5小时，用移液管吸收上清液，加入1/10体积的溶液（含1％BSA，2％）蔗糖，0.05％PEG 20000，0.1％NaN 3，pH7.4）。金标准抗体重悬于0.02 mol / L磷酸盐缓冲液中。浓度为1.5mg / ml的PBS溶液稀释桂花红霉素抗原，用PBS稀释山羊抗小鼠IgG至1mg / ml的溶液。过喷雾器以1.0μL/ cm 2的速率将上述两种类型的溶液喷雾在硝酸纤维素膜上，以形成对照线（C）和检测线（T）的两条线。后分别放入粉碎的硝酸纤维素膜。37℃的培养箱中干燥4小时。后，将硝酸纤维素膜，吸收垫和样品垫依次连接到PVC衬垫上，然后切成4mm宽的测试条。用原料阴性乳作为底物，负基质，赤霉素堆肥材料浓度分别富含0.3，0.5，0.7，1.0，2.0 ng / ml，放置在1，2，3，4号，在同一批5号和6号试纸上，比较结果：T线和C线全部确定为负，T线不发展颜色或颜色明显褪色，C线颜色为正，C线不明显。色被确定为无效。别测试三批样品，每批重复10次。均值被视为最终结果。
　　似物中选择类似于桂花桂花，如结构柠檬酸α-花椰菜，β-lauroside，α-桂树，β-laurosinol，桂花，桂花和桂花的玉米赤霉烯醇模具烯酮稀释用新鲜的原料乳基质在0.5，1.0，2.0ng / ml处，并用作没有茉莉和茉莉花基质的对照组，然后在同一批试验条中取样。察结果。别测试三批样品，每批重复10次。均值被视为最终结果。同一批试纸并检查活动，时间间隔为30天;当时间间隔达到1个月时，对3批样品随机抽取试纸条，每批次重复10次，取平均值。验后，检测稳定性。
　　同一批测试条上测试三批样品，每批重复测试10次，取同样品并用3批不同的测试条进行测试，每批测试一次反复10次。取平均值作为最终结果。于8种不同来源的新鲜牧场牛奶，其中2种补充了200μg/ kg三聚氰胺和4μg/ kg青霉素G抗生素，8种样品与6种其他牛奶混合放牧费用。霉素后，将试验重复20次在每个8组空白对照组的，并且每次加入1微克/ kg的茉莉皂苷后，将试验重复20次，每次8个掺加样品。富的采样结果和干扰物质的实际分析结果。砂菌的合成途径如图1所示。

　　其与溴乙酸叔丁酯反应，得到叔丁基酯中间体，使三氟乙酸反应，得到目标物。叔丁基化。用溴代叔丁基酯和叔丁基酯作为连接体的优点是在最终的脱酯化过程中没有使用强碱，并且在谷甾醇分子中没有使用酯键。

　　龈没有被摧毁。了验证纯化的冰桂抗体的灵敏度，使用ELISA方法进行验证试验。桂花的ELISA标准曲线麻风树在图2中示出很明显从图中的抗赤霉素抗体显示了赤霉素在浓度为0.1至10.0微克/ kg良好的线性关系这证明了这个过程的准备。克隆抗体对麻风树具有高选择性和灵敏度。此，由单克隆抗体制备的快速检测试纸条可以快速灵敏地检测含有麻风树的样品。据测试方法制备的胶体金颜色是勃艮第的，具有约40nm的直径和约528nm的最大吸收波长。Mey的稳定性测试确定了最佳标记量和最佳标记pH，最佳标记条件为pH 8.5（0.1 mol / L）的缓冲溶液和最佳比例。体为5μg/ mL的胶体金。验表明，单克隆胶体联苯菊酯抗体复合物在这些条件下最稳定，并且没有结块。此，使用pH 8.5（0.1mol / l）的Tris缓冲溶液用胶体金（5μg/ ml）标记抗体。测试条的测试检测限，从测试条的每一批测试条可以被稳定和T线的颜色变得比C线下和明显高于线C的颜色下，即使T线。色消失，线C的颜色开始变强，即在0.5μg/ kg的浓度下检测到阳性结果。择含有不同浓度的赤霉素（0，0.5，1.0，2.0μg/ kg）的样品，并使用制备的靛蓝试验条进行测试。
　　5次重复试验的结果示于图3的测试表明，当茉莉茉莉浓度逐渐样品的增加，桂花树价格测试条的T的颜色逐渐减弱和颜色线C逐渐增加，这对应于预期的结果。麻风树朱砂的浓度为0时，线T的颜色明显强于线C的颜色，结果被认为是阴性。浓度茉莉柠檬酸为0.5毫克/千克，T线的强度等同于线C的颜色，结果为是弱阳性：当桔霉素桂花的浓度为1 ，0μg/ kg，线T的颜色低于C线的颜色，结果被认为是阳性，当麻风树肉桂酸的浓度为2.0μg/ kg时，T线几乎是未显示，结果发现强阳性。明通过该试验制备的试纸条具有0.5至1.0μg/ kg的赤霉素检测浓度，并且测试结果显示出良好的重复性。测试条中，6种浓度的4μg/ kg桂花甘油类似物的重复测试结果（表1）显示测试条重复进行5次实验。阴性，表明测试条不与6种不同的结构类似物（4μg/ kg）发生交叉反应。然这六种物质的结构与麻风树的结构非常相似，但可以准确地鉴定试纸，进一步证明试纸具有良好的特异性。测试条的稳定性测试中，对于浓度为1.0μg/ kg的样品，每两个月重复测试三批测试条。10次​​重复的结果是一致的，并且T线比C.线明显更清楚，结果是稳定的。试纸条重复性试验中，取三批试纸，从三个不同样品中取出10个重复试样，结果显示对照组三批试纸的结果均为阴性;在掺杂组中，3批试验片的结果重复10次：共60个试验结果为阳性，显色结果一致，重复性良好。8个不同的放牧组中取200μL新鲜原料奶并将其加入微孔中，然后加入guicin guigrin标准品并混合，然后用试纸重复测试样品20次。果表明（表2），不含有姜醇茉莉在对照组中，各牧场的20次结果为阴性：在1.0微克/ kg的浓度加入时guigroflavine进行了20次测试。果都是积极的。以看出，根据该测试制备的测试条允许以1.0μg/ kg的浓度准确检测赤霉素，并且稳定性和再现性良好。三聚氰胺和青霉素G干扰的情况下，检测结果也不受干扰。这项研究中，半抗原桂花皂苷首先通过有机合成制备，然后将单克隆抗体的制备是通过免疫小鼠人工，这使得它的特异性识别能力麻风树和抗体制备的单克隆抗体已被标记将胶体金表面分配到微孔反应杯中并冻干。后，将抗原麻风树红霉素和二级山羊抗 - 小鼠抗体喷洒到硝酸纤维素膜，然后将硝酸纤维素膜，样品垫和吸收垫贴合顺序地PVC能够快速检测赤霉素。纸。油尺的检测限为0.5至1.0μg/ kg，这在欧盟和国家标准规定的范围内。验表明，该方法具有早期检测和prétraitement.Elle处理适当进行的优点验证需要迅速局部筛选通过检测样品桂花残留甘油在鲜奶可用于乳品企业的原料奶。广应用程序。
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