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[桂花树价格]桂花皂苷通过调节炎症反应因子TNFα和IL6改善2型糖尿病大鼠的脂质代谢

时间:2019/9/23 6:37:33 浏览量:
  
  目的:研究玉米脂多糖(ZMLS)提取的皂苷对高脂饮食和链脲佐菌素(STZ)诱导的2型糖尿病大鼠脂质代谢的影响。
  处理提供了理论依据。法:将60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组,从20组中观察2型糖尿病和桂花总皂苷,建立好2型糖尿病模型后,应观察桂花总皂苷。胃给予总皂苷4 mg /(kg·d)。正常和糖尿病2型组与生理盐水进行比较,治疗4周和8周后处死大鼠。血脂和抗氧化剂,RT-PCR和Western Blot检测肝脏中TNF-α和IL-6的表达。果:HE染色显示,模型组与正常组相比,脂肪空泡明显,提示2型糖尿病大鼠肝脏脂肪代谢明显。fragrans,脂肪液泡大大减少;比较模型组血糖,TG脂质,MDA氧化因子,胰岛素,HDL-C和抗脂质氧化指标SOD均显着升高(P <0.05)桂皮总皂苷4周显着下降(P <0.05),TG和MDA显着下降(P <0.05),HDL-C和SOD显着上升(P <0.05),治疗8周后进一步改善(P <0.05),与正常组相比可见RT-PCR和Western blot,TNF-α表达模式组iL-6明显升高(P <0) ,05),在第4周后有一些下降,但是在治疗第8周后没有明显改善(P <0.05)。
  论:桂花皂苷对2型糖尿病大鼠脂质代谢有明显的调节作用,其机制可能与调节TNF-α和IL-6的表达有关。2型糖尿病是目前最流行的葡萄糖代谢紊乱形式,近年来,随着人口生活条件的改善,该疾病的发病率逐年增加。项新的研究表明,中国目前的2型糖尿病患者高达100万人,已成为威胁人们健康的主要疾病[1-2]。初的症状不是该病的典型症状,主要是通过身体检查,因此很容易被忽略,但是一旦发现大多数已成为晚期糖尿病,因此,对此病的注意和研究是重要性[3-4]。花的作用应该是从一类桂花总皂甙中提取总皂甙,桂花上的桂花是总皂甙或2型糖尿病,目前在文献中是已知的[5-6],但关于其2型糖尿病的脂代谢尚未见报道,本研究集中于这种富含脂肪的饮食+ STZ大鼠的2型糖尿病模型,桂花必须观察总皂苷是否具有降脂作用,以及它们是否是肝肿瘤因子坏死-α(肿瘤坏死因子,TNF-α)和白细胞介素-6(白细胞介素-6,iL-6),如果有改善,则比该参考药物的临床使用要好。洁质量的SD动物(Sprague Dawley)雄性大鼠为6周大,体重为180〜220 g,所有大鼠均购自华中科技大学同济医学院实验动物中心,大鼠证书编号:SCXK(E)2011-0007。

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  养基本饮食和模型的大鼠,垫料喂养高脂饮食的大鼠购自华中科技大学同济医学院实验动物中心,以食品为基础:60%碳水化合物,22%蛋白质,4.6%粗纤维,3.4%脂肪,10.0%其他;低脂饮食:基本饮食66.5%,蔗糖20%,猪油10%,胆固醇2.5%,胆酸钠1%。中科技大学同济医学院药学院提供的桂花总皂苷类药物(纯度为98%)。萄糖试剂盒试剂和仪器,胰岛素,丙二醛(MDA)购自南京建城生物工程研究所,武汉SOD巨石篮子试剂盒生物技术公司;线虫,TNF-α和IL-6多克隆抗体,从圣克鲁斯生物技术有限公司购买的单克隆抗体b-肌动蛋白,抗体稀释液,二抗,颜色试剂盒PV-6002和DAB购自北京中山金桥生物技术有限公司,多聚甲醛购自上海化工有限公司化学试剂。微镜(日本奥林巴斯光学公司)。LEICA RM 2025型病理组织切片机(Leica,德国公司)。PHY-H病理漂移式烘烤处理仪(常州电子仪器有限公司)。
  HH.W21.Cu600型恒温水浴锅(上海代码工厂仪器100),FA2104电子秤(上海右仪器有限公司)。外可见分光光度计(海奥仪器有限公司科学分析)。AMR-100酶标仪(杭州奥盛生物技术公司)。乐蛋白质电泳仪(伯乐实验室(上海)有限公司)。Applied Biosystems仪器pcr(Thermo Fisher China)。组和模型60建模过程在大鼠适应进食后的制备过程中需要10 d,然后分为正常对照组,模型组和总皂苷为组观察方法桂花作为随机数的函数,分别在模型组和模型组后10天,每组20天,桂花总皂苷应观察到高脂饮食组高糖高4周+一次性注射STZ大鼠模型对于2型糖尿病,建立2型糖尿病标准大鼠模型的时间为7 d,连续监测葡萄糖浓度> 15.6 mmol / L桂花后,观察到全组皂苷的变化。功的干预措施应该是桂花总皂苷4 mg / kg·胃内给药正常组和模型组仅接受生理盐水治疗分别在治疗4周和8周后将大鼠处死,在随后的实验中将其处死。

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  用腹腔注射3 ml麻醉的3%戊巴比妥钠大鼠收集血液和肝组织,解剖后将其固定在麻醉的大鼠上,在沿中线腹部切口后立即将其固定在麻醉的大鼠上,肝源性,均匀的肝左叶终末在4%中性福尔马林溶液中固定,置于超低温冰箱中替换备用。上述末尾处,小心地切开胸腔,用注射器10 ml腹部中线,将低温离心机以4,000 rpm的速度离心15 min,将上清液从1分配到离心管中。可以存放5毫升使用。

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  取自福尔马林的肝组织HE染色4%,脱水,石蜡包埋,切片,最后HE染色,装入中性树脂,染色后进行显微镜观察。总RNA提取肝试剂盒提取总RNA,用RT-PCR检测根中TNF-α和IL-6 mRNA的表达,提取完成后取2μgRNA反转录后,以转化率进行扩增,扩增条件如下: 94℃变性2min,94℃变性30s,48℃退火30s,延伸2min 72℃,35个循环; 72℃最终在5分钟内获得延伸。
  组完成后进行5μLPCR产物,0.5%琼脂糖电泳,凝胶电泳完成后,成像仪捕获图像,图像J计算出每个带的荧光强度,每个实验重复3次。物的序列示于表1。esternTNF-α和IL-6蛋白转移表达后,通过电泳分离各组总蛋白提取物中的总蛋白在SDS-PAGE凝胶上使用10%60μg。泳完成后立即将蛋白质转移到PVDF膜上(半干转移法),在完成脱脂牛奶转移至3%封闭2小时后,将蛋白质转移到PVDF膜上将各自的抗1(1:2000)1 H振动筛袋封闭,同时将其在4℃的恒温箱中放置过夜,第二天,清洗3次后,加入适当的二抗(1:5,000)持续2 h,洗涤3次,片剂制成后立即进行化学发光暴露。像分析系统凝胶分级为蛋白质印迹带,每个实验重复3次。用SPSS 19.0软件进行统计分析的统计学方法,比较了两组之间的统计学差异,使用ANOVA分析方法比较了两组之间的差异,使用t检验进行了比较,P <0.05被认为具有统计意义。般而言,所有可见大鼠正常,亮大鼠,白头发,饮食均正常,该组饮食模式已明显增加,但与对照组的精神差异不大,在正常组和模型组之间,在大鼠组之间观察到主要区别是黄大衣色,并且体重明显减轻。
  HE HE细胞染色正常大鼠肝脏的染色组织纹理清晰,排列成放射状的中心静脉。型组表现出明显的肝小叶结构性损伤,而肝细胞明显增大,肝组织中,此外还有大量的脂肪空泡和脂肪变性,桂花治疗4周后应总皂苷;肝细胞仍有少许肿胀和脂肪变性,经过8周的治疗后有明显改善,只有较少的脂肪泡在肝细胞中已基本恢复到正常大小。图1。萄糖和胰岛素水平与正常组葡萄糖模型组相比,空腹血(FBG)明显增加(P <0.05),FINS(空腹率胰岛素)显着下降(P <0.05),总皂苷为桂花4周,空腹血糖显着下降(P <0.05),桂花树价格胰岛素水平显着上升(P <0.05),FBG进一步减少治疗8周后(P <0.05),FINS进一步增加(P <0.05)。

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  2.正常组和模型组的脂质水平TG显着升高(P <0.05),HDL-C显着降低(P <0.05),总皂苷为桂花4周治疗后,TG水平明显降低(P <0.05),HDL-C明显升高(P <0.05),经过8周进一步改善。3.与正常组大鼠相比,抗氧化能力的氧化和修饰,SOD模型显着降低(P <0.05),MDA显着提高(P <0.05 ),总皂苷为桂花4周,治疗8周后SOD明显增加,MDA浓度下降进一步改善(P <0.05)。4. IL-6和TNF-α模式组的正常表达相比组表达明显增加(P <0.05),总皂苷为桂花4周,即显着下降在某种程度上,但治疗8周后无显着性差异(P <0.05)。
  2,表5。RNA与正常对照组相比,模型组IL-6和TNF-αmRNA表达明显增加(P <0.05),总皂苷是桂花4周,其在一定程度上显着降低,但治疗8周后无显着性差异,显着降低(P <0.05)。3,表6。尿病血脂异常是糖尿病并发症的风险之一,尤其是2型糖尿病2型糖尿病[7]。研究报道,2型糖尿病的动脉粥样硬化的发生率是普通人群的2到4倍[8],因此对2型糖尿病的脂类代谢的重视和研究已有非常积极的意义。般来说,脂质,糖尿病,异常的脂质代谢包括数量和质量异常,典型的脂质分布包括高甘油三酸酯脂蛋白和低密度高脂蛋白血症两个重要方面,对于LDL的吸收可以得到更严格的控制通过良好的控制,但是对于高三酰甘油血症的调节更加困难,主要是由于更多的吸收产生TG,合成和自我调节是一个重要方面,尤其是肝脏,肝细胞分泌更多的受体胰岛素的一种,当血糖会引起胰岛素抵抗指数的增加时,胰岛素抵抗呈指数增加会导致胰岛素中游离脂肪酸的增加肝脏,可能导致VLDL合成过多,VLDL太高会导致人体消除TG发生的障碍,从而导致高三酰甘油血症的发生[9-13]。油三酸酯的增加,导致肝脏中脂质的积累,最终导致肝脏脂肪肝的出现,此外,它还可以引起TG血液增加,甚至引起动脉粥样硬化在冠心病患者中[14]。IL-6和TNF-α被认为是炎症反应和2型糖尿病发展的重要因素,IL-6主要由单核巨噬细胞产生,在病理条件下,也可以产生其他细胞,这种反应可以增加到体内炎症反应的状态,它也可以引起相应于2型糖尿病发展的病理性损害[15]。外,IL-6可能参与2型糖尿病相关并发症的形成,这主要是由葡萄糖转运蛋白-4的肝细胞表面减少机制(GLUT-4)表达形成的。
  从而降低脂肪细胞中的胰岛素敏感性,最终促进血脂的增加,最终导致冠心病[16]甚至动脉粥样硬化的发生。TNF-α和IL-6略有不同,并且免疫调节TNF-α,炎症促凝血因子与止血密切相关,后者也与2型糖尿病的发作和进展有关[17 ]。2型糖尿病中,鉴于长期肝细胞并经受高糖浸润的高脂肪含量,导致体内血小板功能和血流异常发生,血小板功能异常和循环系统紊乱,可引起凝血酶异常,并引起TNF-α分泌过多,TNF-α可抵消肝细胞增多,从而使底物表面的肝细胞-1丝氨酸残基的胰岛素受体磷酸化降低了肝细胞对胰岛素的敏感性,最终导致体内葡萄糖和脂质代谢异常[18-19]。国是种植桂花的大国,早在​​远古时代,中国专家就研究了使用桂花治疗糖尿病的方法,但近年来随着分子生物学和细胞生物学的发展,桂花的香气仍然得到证实,不仅可以放弃糖分,而且还具有良好的疗效[20-21],特别是包括降低胆固醇的降脂作用。
  外,药学研究还发现,降脂桂花总皂苷和桂花总皂苷应有一定作用,但桂花总皂苷起着主要作用[22]。本研究中,总皂苷是桂花治疗2型糖尿病大鼠的结果,结果表明:桂花总皂苷可以改善2型糖尿病大鼠的肝功能,调节血脂,最终,为了促进肝脂肪颗粒的排出,桂花树价格除了RT-PCR和Western检测肝组织中IL-6和TNF-α的表达外,结果显示,桂花必须总皂苷可显着降低2型糖尿病,IL-6和TNF-α的表达。示:桂花获得皂苷对2型糖尿病炎症因子有一定改善。上所述,桂花总皂苷可以改善血脂,提高抗氧化能力,从而可以调节其TNF-α和IL-6的相应表达。
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