[桂花树价格]安徽凤阳桂花腐烂病原菌的分离与鉴定
时间：2019/10/6 6:39:06 浏览量：
［目的］弄清凤阳桂花的病原菌。［方法］从凤阳桂花种植区采集桂花标本，采用组织分离法分离纯化病理标本，桂花树价格鉴定其形态特征和分子生物学特性。［结果］分离到的56种病原体为禾本科镰刀菌，尖孢镰刀菌，褐腐镰刀菌，变异根瘤菌和蓝色。菌（Penicillium spp。的分离频率分别为44.64％，21.42％，14.29％，14.29％和5.36％。谷镰刀菌Fg21的生长温度在5至30°C之间，最佳生长温度为25°C，最佳pH为7.0，并且尖孢镰刀菌Fa09的生长温度等于10〜 35℃，最佳生长温度。适pH为7.0°C至28°C，尖孢镰刀菌Fv03的生长温度为10至35°C，最适生长温度为25°C，最适pH为10.0 。源对镰刀菌营养生长的影响是相对的。定，氮源对其营养生长的影响更大。［结论］实验结果为全面防治桂花腐烂病提供了理论依据。花腐烂是一种全球性的桂花病，不仅造成严重的产量损失，而且严重影响桂花的品质[1]。超过30种病原体感染了桂花腐烂[2]和大约15种镰刀菌[3-4]。萎病镰刀菌，禾谷镰刀菌，禾谷镰刀菌，proliferatum，尖孢镰刀菌（F. equiseti）等人[5-8]，与家庭的关系包括尖孢镰刀菌（F. moniliforme），禾谷镰刀菌，尖孢镰刀菌，F。孢镰刀菌，尖孢镰刀菌，尖孢镰刀菌和尖孢镰刀菌[9]。于该疾病是由几种或什至十几种病原体引起的，因此很难控制，但与此同时，在耳朵阶段更难控制耳朵腐烂。病品种是防治桂花腐烂的最佳方法。此，病原菌的鉴定和主要病原体的检测是鉴定该病资源抗性的主要问题。者利用分子生物学的形态学观察和鉴定方法，对安徽省凤阳市桂花的香气进行了采样鉴定和鉴定，并对桂花的茎进行了鉴定。究生物学特性。完全预防和控制具有愉悦气味的桂花腐烂提供理论依据。据现场的天然植物，从2015年7月至2016年9月，在安徽省凤阳县采集了26个病耳样品，然后放入信封袋中进行标记并送回实验室。原体的分离。健康和健康的界限中选择三到五个桂花颗粒，对2％的次氯酸钠进行表面消毒5分钟，用无菌水洗涤3次，放在无菌水上。28°C下生长4天的PDA平板，选择不同的菌落进行形态学分析鉴定纯化的培养物。原体鉴定。态鉴定。据“真菌鉴定手册” [10]，“普通镰刀菌鉴定指南” [11]和“植物病害研究方法” [12]对分离出的病原体进行形态学鉴定。]。过观察菌株的形态特征和培养特性来鉴定病原体。离出的菌株在PDA培养基上生长，观察菌落的形态和颜色。用SNA培养基培养分离的菌株，观察到病原菌[11，13-14]。子生物学中的鉴定[15-16]。分离和纯化的分离物接种到带有表面灭菌玻璃纸的PDA板上，在28°C下生长5天，收集菌丝，使用30μl0.5 mol / L NaOH。然后使用无菌研磨棒进行充分研磨，然后加水。1，500μL（每1，000μL较少的水）摇匀，以12，000 rpm离心5分钟，以上清液为模板。用通用真菌引物ITS1（5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3'）和ITS4（5'-TCCTCCGCTTATTGATATGCATGC-3'）进行PCR扩增。PCR反应系统：预混合Taq 25μL，引物ITS1和ITS4各自1μL，DNA模板2μL，加上ddH2O达到50μL。增步骤：在95°C下预变性3分钟，在95°C变性30 s，在55°C退火45 sec，在72°C延伸1分钟，持续30个循环，最终延伸于72室温保存10分钟，保存在4°C。
CR产物通过1％琼脂糖凝胶电泳检测，并送至上海英杰捷基进行测序，并在GenBank数据库中进行比较。物学特性的研究。度对病原体营养生长的影响。病原菌菌株在PDA平板上于28°C下生长3天，并用6毫米无菌内部穿孔器切开菌落边缘的蘑菇饼，并转移至PDA平板的中央。
5、10、15、20、28。细胞在黑暗中于25、30和35°C的8个温度下培养3天，每次处理重复3次。3天后，通过交叉法测量菌落的生长直径。pH对病原体营养生长的影响。灭菌的PDA介质的pH值调整为3.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0和10.0的0.1梯度mol / L NaOH和0.1 mol / L HCl。6毫米细菌饼移植到PDA板的中心，并在黑暗中于28°C下生长3天，每次处理重复3次。3天后，通过交叉法测量菌落的生长直径。原体利用碳和氮。病原菌株在PDA平板上于28°C下生长3天。菌落饼切成6mm的无菌内径，并转移至葡萄糖，蔗糖，乳糖，果糖，麦芽糖，甘露醇和可溶性淀粉。有不同碳源的固体培养基的中心：由DL-天冬酰胺，牛肉提取物，酵母提取物，硝酸钾，硫酸铵组成的不同氮源的固体培养基，蛋白ept和尿素，在黑暗中于28℃d生长，每次处理重复3次。3天后，通过交叉法测量菌落的生长直径。离纯化了桂花的26个穗，共得到56个菌株，通过镰刀菌和尖头镰刀菌三种镰刀菌的形态和分子生物学鉴定。
瓜子的小分生孢子，许多索，没有分离。形态学鉴定中没有观察到明显的分生孢子，也没有产生子孢子（图2）。初步的形态鉴定之后，选择代表性菌株并提取基因组DNA。引物ITS1和ITS4进行PCR扩增，得到约500bp的靶片段。增产物被送到上海英杰捷基公司测序。序结果（图3）在GenBank数据库中进行了比对，结果与形态学结果一致。过对凤阳耳腐的分离鉴定，发现了禾谷镰孢镰刀菌25株，为分离频率最高的安徽省凤阳病原菌。44.64％;尖孢镰刀菌12株，分离率21.42％；尖孢镰刀菌和米根霉8株，分离率14.29％，青霉菌3株，分离率5.36％。谷镰刀菌是安徽省凤阳县桂花病原菌的重要组成部分，有望作为凤阳县桂花腐烂病的主要防治对象。度对病原体营养生长的影响。花的病原体是不同的，对温度的适应范围也不同，通常对适应的范围也不同（图4）。刀镰刀菌Fg21菌丝可在5至30°C之间生长，菌落的平均直径在2至65 mm之间。落的扩增速率随温度而变化：当合适的温度为20到28°C时，菌落的平均直径为44到65毫米；当温度为最佳温度时，菌落的平均直径为65毫米。25°C。30°C以上，生长速度减慢，平均菌落直径为21 mm，菌丝在35°C处停止生长。孢镰刀菌Fv03菌丝可以达到温度为10至35℃，菌落的平均直径为9至38毫米。落的膨胀速率根据温度而不同：当合适的温度在25至28℃之间时，菌落的平均直径在35至38毫米之间；当菌落的温度在25摄氏度时，菌落的平均直径等于38毫米。佳温度为25°C。丝在5°C停止生长，生长速率低于35°C，平均菌落直径为3 mm。丝的尖孢镰刀菌Fa09可以达到10至35°C的温度，菌落的平均直径为5至44 mm。不同的温度下，菌落的膨胀速率不同：当温度为25到30°C时，菌落的平均直径为32到44毫米；在最佳温度下，菌落的平均直径为44毫米菌丝在5°C停止生长，在35°C以上生长速度减慢，平均菌落直径为10 mm。pH对桂花主要病原体营养生长的影响。pH值为3.0时，PDA板无法固化，而臭桂花腐烂病原体适合广泛的pH值和pH值，并且pH值可以提高4。0至10.0。谷镰孢Fg21在pH 4.0-7.0时生长更快，平均菌落直径为22-38 mm，当pH高于7.0时，菌丝体的生长速率开始降低。利于菌落扩增的pH为7.0。着pH的增加，菌丝体的生长速率逐渐增加。pH为10.0时，菌落的直径达到最大，为39mm。孢镰刀菌Fa09在pH 4.0至7.0和菌落平均直径下增长更快。pH高于7.0时，菌丝体的生长速率开始减慢，但是菌丝体的生长速率在8.0和10.0之间恒定，菌落的直径稳定在43mm。落扩增的最佳pH为7.0（图5）。花的主要病原体利用碳和氮源。花的病原体可以使用各种碳和氮源，并且可以在28°C下经过3天测试的碳源和氮源中生长。长的最佳碳源禾谷镰刀菌Fg21是乳糖和可溶性淀粉，其次是甘露醇，菌落的平均直径≥32 mm，生长不良的碳源是果糖，菌落的平均直径20 mm。孢镰刀菌Fv03在碳源中具有更好的生长，平均直径为39至43mm，其中蔗糖和甘露醇的生长最佳，平均直径为43mm。孢镰刀菌Fa09的最佳碳源是麦芽糖，平均直径为40毫米，未发育的碳源是葡萄糖，平均菌落直径为29毫米（图6）。本科镰刀菌Fg21生长的最佳氮源是酵母提取物，平均菌落直径为43 mm，硫酸铵和尿素的生长中等，菌落平均直径为15-16毫米。孢镰刀菌Fv03的最佳氮源是蛋白ept，菌落的平均直径为44 mm，其次是酵母提取物硝酸钾，菌落的平均直径为42 mm，低生长氮是尿素，菌落的平均直径是16 Mm。孢镰刀菌Fa09的最佳氮源是蛋白ept，菌落的平均直径是41 mm，然后提取牛肉和酵母提取物，平均菌落直径为40毫米，低生长氮源为尿素，平均菌落直径为15毫米（图7）。以看出，三种病原体对尿素氮源的利用较低，尿素不能促进三种镰刀菌的生长。研究以安徽省凤阳桂花繁殖为基础，从桂花耳中分离到56株病原菌，鉴定结果为禾本科镰刀菌25株。离频率为44.64％；尖孢镰刀菌12株，分离率21.42％；尖孢镰刀菌和米根霉8株，桂花树价格分离率14.29％。霉3株，分离频率为5.36％。于产生令人愉快的芬芳桂花的大量病原体，在不同国家/地区报告的不同收益类型也不同。国外据报道，禾谷镰刀菌和赤霉菌是桂花的主要腐烂物种，具有令人愉悦的气味（17-18）。国的一些专家认为，念珠菌是一种优势。据菌株[19-22]，有人认为尖孢镰刀菌是主要病原体[19，23-26]。实验成功分离鉴定出安徽省凤阳地区的桂花香气，结果表明禾谷镰刀菌是桂花病菌的主要病原体。上述研究者的报道不同的是凤阳地区的fragrans，但这与李顺德等人的报道是一致的。[27]。以看出，中国尖孢镰刀菌的优势种群之间存在差异，这可能与各个地区的栽培品种，耕作制度以及气候和环境条件有关。据对镰刀菌生物学特性的研究，禾谷镰刀菌Fg21的最佳生长温度为25°C，最高温度在0至35°C之间，细菌在5°C时可以缓慢生长，最适pH为7.0。糖和可溶性淀粉是碳的最佳来源，酵母提取物，尖孢镰刀菌Fv03和尖孢镰刀菌Fa09可以达到10至35°C的温度，而25°C的温度是尖孢镰刀菌Fv03 hyphe最佳生长温度，随着pH的增加，菌丝的生长越快，pH 10.0时菌落直径越大，蔗糖和甘露醇的碳源越好，越好氮源是蛋白ept； Fa09真菌的最适生长温度为28°C，最适pH为7.0。
佳碳源是麦芽糖，最佳氮源是酵母提取物。源对镰刀菌营养生长的影响相对稳定，而氮源对镰刀菌营养生长的影响更大。安徽凤阳进行的桂花腐烂病研究表明，禾谷镰刀菌是凤阳桂花的主要病原菌，可用于确定腐烂的规律性和发病机理。花在凤阳地区。此，它可用于指导预防和控制耳腐，并为抗病性的再现提供参考。
本文转载自
桂花树价格 http://m.guihua99.net/m/
CR产物通过1％琼脂糖凝胶电泳检测，并送至上海英杰捷基进行测序，并在GenBank数据库中进行比较。物学特性的研究。度对病原体营养生长的影响。病原菌菌株在PDA平板上于28°C下生长3天，并用6毫米无菌内部穿孔器切开菌落边缘的蘑菇饼，并转移至PDA平板的中央。
5、10、15、20、28。细胞在黑暗中于25、30和35°C的8个温度下培养3天，每次处理重复3次。3天后，通过交叉法测量菌落的生长直径。pH对病原体营养生长的影响。灭菌的PDA介质的pH值调整为3.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0和10.0的0.1梯度mol / L NaOH和0.1 mol / L HCl。6毫米细菌饼移植到PDA板的中心，并在黑暗中于28°C下生长3天，每次处理重复3次。3天后，通过交叉法测量菌落的生长直径。原体利用碳和氮。病原菌株在PDA平板上于28°C下生长3天。菌落饼切成6mm的无菌内径，并转移至葡萄糖，蔗糖，乳糖，果糖，麦芽糖，甘露醇和可溶性淀粉。有不同碳源的固体培养基的中心：由DL-天冬酰胺，牛肉提取物，酵母提取物，硝酸钾，硫酸铵组成的不同氮源的固体培养基，蛋白ept和尿素，在黑暗中于28℃d生长，每次处理重复3次。3天后，通过交叉法测量菌落的生长直径。离纯化了桂花的26个穗，共得到56个菌株，通过镰刀菌和尖头镰刀菌三种镰刀菌的形态和分子生物学鉴定。
瓜子的小分生孢子，许多索，没有分离。形态学鉴定中没有观察到明显的分生孢子，也没有产生子孢子（图2）。初步的形态鉴定之后，选择代表性菌株并提取基因组DNA。引物ITS1和ITS4进行PCR扩增，得到约500bp的靶片段。增产物被送到上海英杰捷基公司测序。序结果（图3）在GenBank数据库中进行了比对，结果与形态学结果一致。过对凤阳耳腐的分离鉴定，发现了禾谷镰孢镰刀菌25株，为分离频率最高的安徽省凤阳病原菌。44.64％;尖孢镰刀菌12株，分离率21.42％；尖孢镰刀菌和米根霉8株，分离率14.29％，青霉菌3株，分离率5.36％。谷镰刀菌是安徽省凤阳县桂花病原菌的重要组成部分，有望作为凤阳县桂花腐烂病的主要防治对象。度对病原体营养生长的影响。花的病原体是不同的，对温度的适应范围也不同，通常对适应的范围也不同（图4）。刀镰刀菌Fg21菌丝可在5至30°C之间生长，菌落的平均直径在2至65 mm之间。落的扩增速率随温度而变化：当合适的温度为20到28°C时，菌落的平均直径为44到65毫米；当温度为最佳温度时，菌落的平均直径为65毫米。25°C。30°C以上，生长速度减慢，平均菌落直径为21 mm，菌丝在35°C处停止生长。孢镰刀菌Fv03菌丝可以达到温度为10至35℃，菌落的平均直径为9至38毫米。落的膨胀速率根据温度而不同：当合适的温度在25至28℃之间时，菌落的平均直径在35至38毫米之间；当菌落的温度在25摄氏度时，菌落的平均直径等于38毫米。佳温度为25°C。丝在5°C停止生长，生长速率低于35°C，平均菌落直径为3 mm。丝的尖孢镰刀菌Fa09可以达到10至35°C的温度，菌落的平均直径为5至44 mm。不同的温度下，菌落的膨胀速率不同：当温度为25到30°C时，菌落的平均直径为32到44毫米；在最佳温度下，菌落的平均直径为44毫米菌丝在5°C停止生长，在35°C以上生长速度减慢，平均菌落直径为10 mm。pH对桂花主要病原体营养生长的影响。pH值为3.0时，PDA板无法固化，而臭桂花腐烂病原体适合广泛的pH值和pH值，并且pH值可以提高4。0至10.0。谷镰孢Fg21在pH 4.0-7.0时生长更快，平均菌落直径为22-38 mm，当pH高于7.0时，菌丝体的生长速率开始降低。利于菌落扩增的pH为7.0。着pH的增加，菌丝体的生长速率逐渐增加。pH为10.0时，菌落的直径达到最大，为39mm。孢镰刀菌Fa09在pH 4.0至7.0和菌落平均直径下增长更快。pH高于7.0时，菌丝体的生长速率开始减慢，但是菌丝体的生长速率在8.0和10.0之间恒定，菌落的直径稳定在43mm。落扩增的最佳pH为7.0（图5）。花的主要病原体利用碳和氮源。花的病原体可以使用各种碳和氮源，并且可以在28°C下经过3天测试的碳源和氮源中生长。长的最佳碳源禾谷镰刀菌Fg21是乳糖和可溶性淀粉，其次是甘露醇，菌落的平均直径≥32 mm，生长不良的碳源是果糖，菌落的平均直径20 mm。孢镰刀菌Fv03在碳源中具有更好的生长，平均直径为39至43mm，其中蔗糖和甘露醇的生长最佳，平均直径为43mm。孢镰刀菌Fa09的最佳碳源是麦芽糖，平均直径为40毫米，未发育的碳源是葡萄糖，平均菌落直径为29毫米（图6）。本科镰刀菌Fg21生长的最佳氮源是酵母提取物，平均菌落直径为43 mm，硫酸铵和尿素的生长中等，菌落平均直径为15-16毫米。孢镰刀菌Fv03的最佳氮源是蛋白ept，菌落的平均直径为44 mm，其次是酵母提取物硝酸钾，菌落的平均直径为42 mm，低生长氮是尿素，菌落的平均直径是16 Mm。孢镰刀菌Fa09的最佳氮源是蛋白ept，菌落的平均直径是41 mm，然后提取牛肉和酵母提取物，平均菌落直径为40毫米，低生长氮源为尿素，平均菌落直径为15毫米（图7）。以看出，三种病原体对尿素氮源的利用较低，尿素不能促进三种镰刀菌的生长。研究以安徽省凤阳桂花繁殖为基础，从桂花耳中分离到56株病原菌，鉴定结果为禾本科镰刀菌25株。离频率为44.64％；尖孢镰刀菌12株，分离率21.42％；尖孢镰刀菌和米根霉8株，桂花树价格分离率14.29％。霉3株，分离频率为5.36％。于产生令人愉快的芬芳桂花的大量病原体，在不同国家/地区报告的不同收益类型也不同。国外据报道，禾谷镰刀菌和赤霉菌是桂花的主要腐烂物种，具有令人愉悦的气味（17-18）。国的一些专家认为，念珠菌是一种优势。据菌株[19-22]，有人认为尖孢镰刀菌是主要病原体[19，23-26]。实验成功分离鉴定出安徽省凤阳地区的桂花香气，结果表明禾谷镰刀菌是桂花病菌的主要病原体。上述研究者的报道不同的是凤阳地区的fragrans，但这与李顺德等人的报道是一致的。[27]。以看出，中国尖孢镰刀菌的优势种群之间存在差异，这可能与各个地区的栽培品种，耕作制度以及气候和环境条件有关。据对镰刀菌生物学特性的研究，禾谷镰刀菌Fg21的最佳生长温度为25°C，最高温度在0至35°C之间，细菌在5°C时可以缓慢生长，最适pH为7.0。糖和可溶性淀粉是碳的最佳来源，酵母提取物，尖孢镰刀菌Fv03和尖孢镰刀菌Fa09可以达到10至35°C的温度，而25°C的温度是尖孢镰刀菌Fv03 hyphe最佳生长温度，随着pH的增加，菌丝的生长越快，pH 10.0时菌落直径越大，蔗糖和甘露醇的碳源越好，越好氮源是蛋白ept； Fa09真菌的最适生长温度为28°C，最适pH为7.0。
佳碳源是麦芽糖，最佳氮源是酵母提取物。源对镰刀菌营养生长的影响相对稳定，而氮源对镰刀菌营养生长的影响更大。安徽凤阳进行的桂花腐烂病研究表明，禾谷镰刀菌是凤阳桂花的主要病原菌，可用于确定腐烂的规律性和发病机理。花在凤阳地区。此，它可用于指导预防和控制耳腐，并为抗病性的再现提供参考。
本文转载自
桂花树价格 http://m.guihua99.net/m/
首页
微信