[桂花树价格]桂花CRb根病基因的分子标记扫描与筛选
时间：2019/10/21 6:30:56 浏览量：
大桂花根病是一种土壤传播的疾病，严重影响了桂花的生长，这已成为桂花的主要疾病之一。CRb基因是对抗桂花茎的重要基因。这项研究中，选择了六个已发布的CRb分子标记以获得与CRb密切相关的TCb05共有标记。标记在抗病纯材料中产生279 bp PCR扩增片段，在敏感材料中产生250 bp PCR片段，在杂种抗病材料中产生279 bp和250 bp PCR片段。TCR05分析了选择材料的24个样品，所有样品均包含CRb基因，其中8个是纯合子，16个是杂合子，结果基本上与现场鉴定结果相对应。桂花是中国重要的蔬菜作物。桂花的根部疾病是由根部痰的感染引起的土壤传播疾病[1]。霉颗粒侵入桂花吸收性毛发的细胞并穿透根皮层形成层，从而刺激根部的实质细胞分裂[2]。今为止，已鉴定出至少8种大桂花的根疾病基因，即Crr1，Crr2，Crr3，Crr4，CRa，CRb，CRc和CRk [3-7]。中，CRb对根霉的生理小种2、4和8具有良好的抗性，并具有显性的单基因遗传特征[6]。这项研究中，验证了六个已发布的CRb标记，并分析了24种抗性遗传物质资源，以促进在选择桂花中选择CRb基因并提供抗性遗传物质资源。于筛选并与CRb基因遗传密切相关的测试材料是感染的桂花自交系YH-036、291自交品系冠和两者的杂交组合。
共选择了24种遗传资源（表1），其中BCYM-1 BCYM-4和ZY-1 ZY-4构成了8个具有根和根的桂花无性系，以及16种日本和韩国种子。公司正在测试尚未推广的新品种。个品系和近交品种都选择了最佳的个体植物进行测试。2显示了该疾病的抗根CRb基因的分子标记测试引物及其序列，桂花树价格用于筛选与CRb基因及其序列密切相关的六对引物。
过改良的CTAB方法，DNA和PCR扩增被用于从桂花中提取基因组DNA [8]。PCR反应中使用的试剂购自生物工程（上海）有限公司。PCR反应的总体积为20μL：10μLPCR Master Mix（2×），1μL上游引物和下游引物（10 U）和2μL的50 ng /μL的将基质DNA添加到96孔PCR板中。20μL添加ddH2O。PCR反应步骤：在94°C下预变性5分钟，在94°C下变性0.5分钟，在62°C下退火1分钟，在72°C下延伸1分钟，35个循环，建议在72°C延伸10分钟，在4°C储存.PCR产物在1.5V的琼脂糖凝胶电压为5V / cm的条件下电泳1h，用Goodview染色通过Bio-RAD凝胶成像系统成像，然后观察并保存结果。过PCR扩增和分别分析16对杂交引物YH-036，Crown 291和16对分子标记进行筛选，以筛选最佳分子标记。PCR鉴定桂花的遗传资源。用选定的分子标记，鉴定和分析了24种桂花的遗传资源。桂花种子发芽并播种在50孔托盘中，将托盘中使用的底物在高温下灭菌并置于文化孵化器。个天竺葵遗传资源有4个重复，每个重复6个，随机排列。
洁并称重具有非常敏感的根部病害的植物的根部，加入适量的水，桂花树价格并用喷雾器研磨混合物，直到匀浆与灭菌基质混合。以2×108孢子/ g的浓度计数。土壤的基质和pH调节至约5.5，这为细菌的发病机理创造了良好的条件。桂花幼苗长到3至4片真叶时，将它们移植到必须添加到细菌中的营养食品中，并将底物的水分含量保持在60％左右。25分钟的培养箱中培养40天后℃，研究了植物对病害的抵抗力。除植物后，将根部洗净并研究其抗病性。
要肿瘤出现在主根，侧根或纤维根中，无论其大小如何，都不会将主要肿瘤，侧根或纤维根确认为抗病性疾病，并记录为疾病。桂花，易感性状及其杂种组合的候选引物的PCR扩增表明，只有TCR01和TCR05可以增强CRb阳性或隐性桂花基因的共性。体的带。中，TCR05在抗病诱导系YH-036中扩增了279bp的PCR片段，在291敏感自交系中扩增了250bp的PCR片段。的杂交组合。应于亲本的两个条带（图1）与文献[6]一致，并且在重复实验中稳定。此，TCR05可以用作理想的分子标记，以鉴定桂花的正或隐性CRb。用分子标记TCR05鉴定了24个桂花遗传资源的CRb基因（表3）。图2所示，TCR05可以扩增24个桂花资源中的PCR片段，其中一个279 bp的抗性片段从1到8个遗传物质资源中被扩增为CRb / CRb纯合子。传物质资源；从其他16种材料中扩增出279bp的抗性片段和250bp的敏感片段，并将其鉴定为CRb / crb杂合遗传资源。测试的24种桂花种质资源显示出对硬皮病的总体抵抗力，但是在11种，18种和24种种质资源的个体种质资源中出现了单个肿瘤。中，第11种被测材料的侧根中有3个直径约5 mm的肿瘤，地上部分的症状不明显。18日，桂花资源主根上有5个约3mm的肿瘤，地上部分显示出失水和枯萎。
24号在纤维根中仅显示出轻微的突起，并且对地上植物的生长没有显着影响（表4）。胀的根病最早于1737年在地中海西部和南欧发现，并成为一种全球性疾病[9]。年来，中国的桂花根肿病发病机理迅速扩大，面积大大增加，导致桂花的产量和质量显着下降，它已成为桂花的主要疾病之一。产实践表明，不仅化学和生物及其他预防措施和预防方法有效，而且化学控制环境污染[10]。择桂花新品种是一种有效，经济和环境友好的方法[11]。经成功地将许多来自欧洲酞菁的抗病基因导入到桂花的遗传材料中，主要通过鉴定方法进行了桂花根的抗病性测试。过人工疫苗接种，对外部环境和低产量具有重大影响。
性基因的类型无法确定[12]。此，迫切需要使用分子标记辅助选择方法来弥补人工接种的缺陷。项研究检查了与抗病基因CRb紧密相关的SCAR TCR05标记，该标记具有稳定可靠的结果，操作简单，高效，鉴定杂合子和纯合子以及可以有效地用于桂花的未来繁殖。Piao等（2004）在工作中[6]使用韩国和日本的10个易感品种和37个抗性品种开发了CRb基因座的分子标记，其中18个抗性品种包含TCR01标记。TCR05。两个标记尚未在品种中扩增。研究使用TCR05鉴定了来自日本和韩国的24种新的根病遗传资源以及CRb抗性基因的存在，表明CRb抗病基因对该病具有抗性扎根于国外的大型桂花品种。已被广泛采用，应引起中国育种工作者的注意。研究中的人工接种试验表明，含有CRb杂种基因的大型桂花遗传资源11、18和24具有不同程度的敏感性，而其他21种遗传资源则表现出抗根病，标签的结果不完全相同。目前为止，对桂花根病基因的类型，作用方式和基因间相互作用的研究还不够全面：与之相关的八个基因座击球杆阻力分别为Crr1，Crr2和Crr3。Crr4，CRa，CRb，CRc和CRk，其中Crr3，CRa，CRb，CRk都位于A03染色体上，Crr1，Crr2和Crr4分别位于A08，A01和A06染色体上，而CRc位于染色体上染色体A02。据对桂花11、18和24的种质资源敏感性水平的不同分析，CRb基因对疝的抗性可以与其他抗病基因以及作为加性效应和其他遗传相互作用。
假设的效果值得进一步验证，以便为将来的抗病育种提供理论依据。
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桂花树价格 http://m.guihua99.net/m/
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性基因的类型无法确定[12]。此，迫切需要使用分子标记辅助选择方法来弥补人工接种的缺陷。项研究检查了与抗病基因CRb紧密相关的SCAR TCR05标记，该标记具有稳定可靠的结果，操作简单，高效，鉴定杂合子和纯合子以及可以有效地用于桂花的未来繁殖。Piao等（2004）在工作中[6]使用韩国和日本的10个易感品种和37个抗性品种开发了CRb基因座的分子标记，其中18个抗性品种包含TCR01标记。TCR05。两个标记尚未在品种中扩增。研究使用TCR05鉴定了来自日本和韩国的24种新的根病遗传资源以及CRb抗性基因的存在，表明CRb抗病基因对该病具有抗性扎根于国外的大型桂花品种。已被广泛采用，应引起中国育种工作者的注意。研究中的人工接种试验表明，含有CRb杂种基因的大型桂花遗传资源11、18和24具有不同程度的敏感性，而其他21种遗传资源则表现出抗根病，标签的结果不完全相同。目前为止，对桂花根病基因的类型，作用方式和基因间相互作用的研究还不够全面：与之相关的八个基因座击球杆阻力分别为Crr1，Crr2和Crr3。Crr4，CRa，CRb，CRc和CRk，其中Crr3，CRa，CRb，CRk都位于A03染色体上，Crr1，Crr2和Crr4分别位于A08，A01和A06染色体上，而CRc位于染色体上染色体A02。据对桂花11、18和24的种质资源敏感性水平的不同分析，CRb基因对疝的抗性可以与其他抗病基因以及作为加性效应和其他遗传相互作用。
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