[桂花树价格]小桂花小孢子培养技术研究进展

　　总结了影响桂花小孢子培养的主要因素，以及影响桂花小孢子再生的因素，以及再生植物的继代培养和添加技术。花的小孢子，以及该技术的问题和前景。技术在研究和生产中的应用前景。蓝型油菜（Lol。奥尔森（Olsson）是中国重要的蔬菜植物，是芸苔科的菊科（Asteraceae）的一个亚种，在中国秋季和冬季生产和供应蔬菜。
　　是中国种植面积最大，产量最高的主要蔬菜作物。桂花是具有明显杂种优势的异花授粉植物。在，根据常规的自动杂交方法选择亲本。方法需要很长的时间，并且需要5到7天的时间才能培育出纯合的亲本。离小孢子培养（IMC）技术是一种新兴的生物技术，其特征在于单细胞胚胎发生率，高胚胎发生率和高同步性。用免费的小孢子培养技术可以快速获得纯合双单倍体（DH）植物，并获得纯合亲本系，在2-3年内即可获得纯合同源系，极大地促进了繁殖。程。1980年代后期，日本学者Sato等[1]首次通过生长游离小孢子获得了春季的小孢子胚和桂花早期再生的植物。国研究人员盛放月桂树。孢子的培养[2〜5]。那时起，国内外专家就影响小孢子发生和微孢子发生的因素，小孢子的再生和倍增机理以及免费小孢子培养技术的实际应用进行了许多重要的探索。多重要的研究进展。因型基因型是影响小孢子胚胎发生率的关键因素。因型对小桂花小孢子胚发生能力的影响体现在两个方面：基因型反应范围。明清等[2]，李根义等[4]，姜无生等[6]均发现，小桂花微孢子的胚发生能力较高，且胚型分别为基因型。94.12％，92.31％和87.50％；徐彦辉等［试验结果表明，小的游离桂花微孢子与胚的基因型比很低，仅为18.92％。b）胚胎发生频率（生产率）的差异。量研究表明，不同基因型的桂花胚芽能力有明显的差异[2、4、6〜14]，四倍体桂花植株的游离小孢子培养也证明了小孢子胚的基因型。量具有重大影响[15]。立荣等。[16]表明，桂花小孢子的胚发生能力与其他遗传性状相同，这是基因调控的遗传调控[16]。因型是对桂花的内在影响。花微孢子发生的开始。素[17]。桂花小孢子胚的发育能力也与植物的种类有关。帆等[18]报道，桂花多肉植物的胚发生微孢子率高于品种，早期成熟率高于普通和成熟后期。淑桂等[19]报道，小桂花孢子的胚诱导率和胚产量比重叠球型高。部环境供体植物生长的温度条件是影响小孢子培养的关键因素。

　　常，花蕾来自健壮植物的生长，可以进行更好的培养。期植物的温度较低，昼夜温度为10至25°C，胚状体的产量较高[3]。照的持续时间对小孢子胚的产生也有一定的影响：长时间的日照（14至18 h）和低温（15至15 h）下胚状体的数量和植物的再生速率很高。20°C）[7]。树贵等[9]表明，芽期供体期的温度条件是小孢子胚胎发生的关键因素：丘疹的前三天温度为14℃/ 24℃。（晚上/）。展。此，在没有人工气候箱的情况下，建议在春季（三月至四月）进行桂花的小孢子培养，以避免在秋季使用不利的小孢子培养环境。光短和高温[15]。理状况供体植物的年龄和花序的年龄对桂花的微孢子发生有不同的影响。树兴等[15]表明，植物年龄对桂花的二倍体和四倍体栽培品种的小孢子的胚发生率有显着影响，开花期是植物生长的好时机。花的小孢子。树贵等[9]表明，盛开的花蕾和供体植物营养状况良好，有利于植物的胚发生和再生。正征等[20]表明，植物的年龄对胚诱导率有一定的影响：在开花充分的时期和开花后期收集的花芽具有较高的胚发生率。于没有桂花的小孢子生长，则更高。颖等[10]指出，桂花小孢子在开花期的胚发生率高于开花初期和开花后期的胚发生率。[13]和王秀英等。[21]相似。午比早上好。育时期在发育过程中选择合适的花粉是增加桂花中花粉诱导频率的重要措施。胎发生的发生大致发生在具有单核边缘的单核边缘的短暂发展中[1，16]。此期间，小孢子的主要特征是较大的孢子占细胞总体积的50％以上。央液泡，细胞核压在细胞壁附近，细胞质相对不透明，富含核糖体，大量粗糙的内质网，线粒体和质体随机分布在细胞内。[15，17]。明清等[3]发现花蕾与小孢子的发育密切相关。CC11基因型的花桂花在2.0至2.5 mm之间时，位于单核相中部的小孢子占41.7％，而单核边缘相的小孢子占58.3。时，小孢子的胚产量最高。金梅等[17]的细胞学观察表明，当花蕾长2.0〜3.0mm，花瓣长/花药比为1/2〜4/5时，为50％〜70 ％的小孢子在单核边缘时期。条件最适合种植大的桂花和游离小孢子花药。芽的大小也与接种材料的培养条件有关：例如，当温室中生长的F1代材料的花芽达到6〜7 mm时，小孢子仍处于单核的后期，但是田间生长的大型桂花植物是小花药。于孢子生长的花蕾只有2-4毫米长。此，应结合细胞学和植物学特征确定采样时间和样品大小。种浓度接种浓度是小孢子培养成功的重要因素之一：浓度过高和过弱都无法促进胚胎发育。浓度过高时，会消耗大量的营养成分并释放出许多有害物质，从而影响胚胎的发育。孢子必须具有种群效应，并且低浓度也不会促进小孢子的生长和发育。常认为小孢子密度为2×104-4×104 / mL，最近的研究表明接种浓度为1×105 -2×105 / mL最合适[22]。础培养基培养基是诱导胚胎发生的基础，不仅影响小孢子细胞的分裂，而且影响植物的再生过程。Li Genyi等[5]使用改良的Lichter培养基，日本专家Sato等[1]使用NLN培养基（Nitsch和Nitsch），其中大量元素减半，Zhang Fenglan等。[8]使用BM培养基制成没有桂花的小孢子。化。年来，许多研究人员已使用NLN基础培养基培养无桂花的小微孢子，并且其培养效果比其他培养基显着提高[3，4，6，9，19]。〜21]。倍体桂花的游离小孢子的培养也可以用NLN基本培养基进行[15]。糖为了培养小桂花孢子，蔗糖被用作碳源。糖不仅提供小孢子生长所需的能量，而且还能维持细胞的渗透压。武胜等［23］比较了不同浓度无蔗糖的无激素NLN对小桂花孢子培养的影响：结果表明，蔗糖浓度为13％，培养效果较好，可能没有桂花。子培养提供了参考。有研究选择蔗糖浓度为10％和17％，这表明高浓度的蔗糖可以维持小孢子，而低浓度的蔗糖可以促进小孢子的分裂和生长。源激素在小桂花孢子的培养中，外源激素对胚胎形成和植物再生的影响不一致。正征等[20]表明，在培养基中添加6-BA可以显着促进胚状体的形成：当6-BA的浓度为0.05 mg / L时，胚的产量最高。Zhang Yali等[13]和傅文婷[14]研究了6-BA促进胚状体的出现和发育，并且6-BA的合适浓度为0.2 mg / L。延辉等[8]也报道了6-BA处理过的大桂花。孢子发生具有一定的启动子作用：最适浓度为0.2 mg / L，桂花树价格但对6-BA的影响对于难于胚胎形成的基因型并不显着。扬等[24]估计6-BA的最佳浓度为0.4 mg / L，而NAA的最佳浓度为0.10〜1.00 mg / L，这抑制了6-BA的最佳浓度。花的小孢子胚的出现，浓度越高，抑制作用越大。外，当进行四倍体桂花微孢子培养时，当6-BA浓度为0.2 mg / L且ANS的浓度为6-BA时，小孢子桂花胚的发生频率更高。0-1.0 mg / L。NAA浓度大于2.0 mg / L时出现抑制作用。NAA浓度为0.5 mg / L和6-BA浓度时出现抑制作用为0.05〜0.20 mg / L时，桂花树价格小桂花孢子的胚发生率高。BA浓度超过0.4 mg / L时会发生抑制作用[15]。建峰等[11]表明6-BA和NAA对桂花小孢子胚的诱导率影响不大，而小孢子胚的诱导率却降低。浓度太大时。武胜等［6］表明，添加0.5 mg / L的6-BA + 0.1mg / L的NAA培养基可抑制桂花小孢子的胚发生。能。

　　培养基中添加适量的活性炭可以加速培养过程，并提高小孢子胚的产量，子叶状胚的速度和桂花胚体的发育[7]。[15，18，25〜27]，但添加了活性炭的浓度。符合。延辉等。[7]报道，0.01〜0.02g / L的活性炭可以显着增强桂花小孢子胚状体的形成。树兴等。[15，25]发现添加0.05至0.10 g / L活性炭显着促进了二倍体和四倍体桂花微孢子的胚发生特性和发育同步。Sun Dan等[26]研究表明，向培养基中添加0.10 g / L活性炭可以提高大多数大型桂花品种的小孢子胚产量。量的活性炭将有毒物质吸附到培养基中的胚胎上。武胜等[27]的研究表明，0.50 g / L的活性炭对桂花的小孢子胚的诱导和形成是有利的。帆等。[18]还发现，在培养基中加入1.40 g / L活性炭后，一些最初没有胚状体形成的大型桂花基物质具有胚状体，不能形成较少的胚状体。物质产生更多的类胚体，但个别物质不能获得胚胎或只能正常繁殖的一对多的胚胎，Han Yang等[24]发现高浓度的炭疽病。小桂花有活性孢子胚的存在已显示出抑制作用。温预处理温度（冷吹）在小孢子诱导的类胚培养条件中起重要作用。养前在低温下对花蕾进行预处理对小桂花微孢子的胚发生有一定影响。藤等。[28]报道，花蕾的冷处理可能会增加桂花中小孢子胚胎的发生率。正征等［20］研究表明，在4℃花序处理1〜2天，小桂花微孢子的诱导率显着提高。翠玲等[29]也得到了相同的结果，表明在低温或长期处理下的胚胎诱导胚状体的可能性较小。建峰等[11]研究表明，小尺寸的桂花微孢子胚的诱导率在低温处理后0〜5天没有显着差异，而小剂量的桂花孢子胚的诱导率却没有显着差异。过5天后，胚胎明显减少。温下的预处理（热冲击）当小桂花小孢子播种到培养基上时，有必要从高温开始并引起小孢子发育过程的变化，也就是说从配子体的发展到孢子体的发展。

　　根义等[4，5]认为35°C的高温预处理对于诱导桂花中的小孢子胚芽很重要。作用机理可能是防止小孢子的产生。过改变小孢子的发育而发展成成熟的花粉粒。育，促进其沿着胚胎发育途径的发育，并最终形成小孢子胚胎。立荣等[16]估计，当桂花在35°C高温下诱导时，小孢子表现出许多不同的细胞分裂方式，但对称分裂法占主导。公社等。[30]应用FDA和DAPI荧光显微镜技术观察高温处理对桂花微孢子培养的影响。果表明，在33°C预处理24 h后，转移至25°C，尽管第一天的小孢子存活率显着降低，但仍保持在一定水平，并且扩展的小孢子主要是球形的，主要是对称分裂，小孢子能够形成细胞多分裂后多细胞紧密。组最终形成胚状体。飞等。

　　[31]表明，桂花小孢子发育的主要途径是B-途径，在33°C预处理24小时后，单倍体小孢子发育，染色体自然加倍，从而刺激了子孢子形式的小孢子。展道路。兵等。[32]表明，在33°C预处理24 h显示，不同基因型桂花的胚芽数量存在显着差异。导效率越高，基因型对高温的敏感性越高。胎的体积增加更多。武生等。[6]发现最有可能诱导胚胎的基因型对23°C持续24 h的胚胎诱导率有最好的影响，而难以诱导胚胎的基因型则在23℃处理。33℃。后胚胎的诱导率更高。[30]如果高温诱导处理后小孢子裂解的频率不同，则取决于基因型，桂花小孢子培养物的高温预处理时间预计会有所不同，通常为24-48 h。果将其用作评估指标，则必须在高温下处理小孢子。感期发生在培养开始后的12小时内，如果将胚胎发生用作评估指标，则是在培养开始后的24小时内。荡培养无桂花的小孢子培养主要包括固体和液体培养。常，液体培养基中的营养物容易被小孢子吸收，但它们的渗透性很低，导致产生棕色胚芽。树兴等。[25]在干式振荡器（60 rpm）上将桂花小孢子培养7天，共培养7天。果表明，搅拌可改善培养基的通气并促进原生质体的快速发育。叶型的胚胎。提高了子叶胚率和胚状体发育的同步性，并促进了幼苗直接形成小孢子。
　　军等。[33]报道，低频振荡（80 rpm）显着改善了小桂花小孢子胚的数量。早期研究中，小桂花小孢子胚的播种率非常低，仅从5％到10％[1]。花对植物小孢子的再生由基因控制，具有高再生能力的基因型易于形成，有利于小孢子胚再生植物的形成，但小孢子的种植率高同一基因型在不同发育阶段的差异很大。具有快速再生幼苗的能力，鱼雷期胚更难以播种，球状和心形胚停滞。究表明，从心形到鱼雷阶段，有一半以上的胚胎被转化为幼苗，其中5-10％是白化病幼苗。扬等[34]发现，成熟的子叶状胚可达20％，子叶发芽率大于90％，早期胚尤其是心脏难以播种。和球状胚的幼苗率为零。的成熟桂花微孢子的成熟胚在NLN-13培养基中的保留时间对植物的再生有很大的影响。凡等[18]表明，将在液体培养基中保留14天和21天的小孢子胚转移到MS0固体培养基中进行了56天，苗率分别达到了85％和81.6％，分别。息小孢子在28天和35天的最终播种率分别为63.3％和42.7％，远低于前两天。多研究表明，固体培养基中琼脂含量的增加可以降低培养基中的水分含量，从而提高小桂花胚状体的再生率。扬等。[34]表明，小桂花小孢子成熟后需要较干燥的生长环境，因此成熟的子叶胚迅速转移到相对干燥的培养环境中可促进植物的再生。含量为1.2％时，对桂花的小桂花胚非常有利，并且再生植物的比率为50.5％。帆等。[35]用1.2％琼脂培养基（含MS0培养基）处理的小桂花小孢子胚中的死胚数最少，再生植物的种植率最高。达到85.8％。树兴等。[25]发现，当进行四倍体桂花小孢子培养时，再生植物的播种率与培养基中的水分有关。合于胚状体形成的培养基是B5 + 3％蔗糖。+ 1.2％琼脂。
　　据姜武胜等［23］的研究，有助于形成中华小孢子小孢子胚的培养基为B5 + 0.2 mg / L 6-BA + 3％蔗糖+ 1％琼脂。帆等[18]还发现，用活性炭处理获得的桂花胚在光照下发绿，发芽和植株的能力要比不使用活性炭的情况要小。可能是由于活性炭的吸附不是选择性的：当浓度超过适当的浓度时，存在于吸附介质中的有害物质也会被吸附，并且生长调节剂，铁盐和维生素与胚胎的生长和分化密切相关。质。此，培养基中活性炭的浓度不应过高，否则会产生负面影响。扬等[34]表明，培养基中的活性炭添加量比不含活性炭的添加量高出20％至122.5％。有200 mg / L活性炭的培养基对小桂花胚最有利。种。Jiang Wusheng等人的研究[23]表明，桂花的小孢子可以每25-30天在B5传代培养基+ 0.20 mg / L 6- BA + 0.02 mg / L NAA。孢子胚再生后，将3到5厘米高的健康芽转移到MS + 0.10 mg / L NAA的生根培养基中，形成完整的植物，然后将其移植到带有花园土壤的牡蛎中。中心，根可以在7天后生根，可以存活10到15天，存活率可以达到95％。

　　克/升的NAA培养基最适合小桂花的小孢子生根。延辉等。[7]研究了KT和6-BA对桂花小孢子胚再生的影响，并显示了用MS + 0.8％琼脂+ 3％接种小孢子胚。糖+ 0.1 mg / L KT + 0.5 mg。/ L 6-BA的固体培养基上，两种小孢子胚再生植物基因型的无性繁殖成活率分别为82％和92.5％，而小的再生胚植物为1/2 MS + 3％蔗糖+ 0.8％琼脂+ 0.1 mg / L的桂花小孢子NAA上的生根培养基具有良好的生根，再生的生根植物可以在体外生长。入锅1/2沃土+ 1/2。Zhang Yali等[13]表明，向B5培养基中添加0.10 mg / L的GA3最有助于桂花小孢子的分化，而添加0.10 mg / ml L 1/2 MS ANA特别用于桂花小孢子的再生。物生根。
　　Zhou Ying等人的研究[10]显示，平均MS + 0.10 mg / L ANA最适合生根含有小桂花小孢子的再生植物。云云等[36]指出，桂花微孢子再生能力的遗传与显性显性模式相对应，也就是说它主要受核基因控制，基因的作用主要是累加的，而植物的高再生能力被掩盖了。传控制性，其窄遗传力为70.6％。研究结果为提高小孢子胚再生能力的桂花材料提供了重要的手段，具有较高的小孢子胚再生能力的材料可与这些材料杂交。了提高植物的后代再生能力。物再生。有通过小孢子培养获得的再生植物的染色体在二倍体上加倍时，才能用于选择实践。花再生植株中DH植株的频率不完全相同，但频率很高。明清等[3]的结果表明，小孢子培养产生的小桂花小孢子再生植株的自然倍增率在50％到70％之间。飞等［31］表明，小桂花小孢子胚的再生植株具有较高的自然倍增率，并且与小孢子培养过程中热激的诱导密切相关。凤兰等。[7]表明，桂花的小孢子再生植物在春季和秋季的自然倍增率不同，大多数达到70％。据信，从小的游离的桂花小孢子获得的再生植物是自然加倍的。为二倍体特征。项研究的结果为在选择桂花中有效利用免费的小孢子培养技术提供了广阔的前景。前，通过0.2〜4.0mg / g秋水仙碱处理再生的单倍体植物主要用于人工加倍。En résumé， la culture de microspores libres， qui a une grande valeur théorique et pratique， a de plus en plus retenu l’attention des chercheurs et a été largement utilisée [37-46]. Cependant， son application pose encore de nombreux problèmes théoriques et pratiques: par exemple， dans la plupart des petits génotypes d’osmanthus， on peut obtenir des embryons de microspores et des plantes régénérées par culture de microspores libres， mais quelques génotypes ne peuvent pas obtenir de microspores. Embryons et plantes régénérées， et cette technique n’a pas encore atteint le niveau de manipulation aléatoire des gamètes mâles， de plus， l’étude théorique sur le mécanisme d’initiation des microspores， de développement microscopique， de voies de développement et d’aspects physiologiques et biochimiques associés à Osmanthus fragrans fait toujours défaut. 。L'utilisation de la technologie de culture de microspores libres permet d'obtenir de grands embryons de microspores d'osmanthus et des plantes régénérées appartenant à un grand nombre de génotypes， mais elle est encore loin d'établir une grande fleur d'osmanthus parfaite et à haute fréquence. L'étendue du système de régénération des spores. Les plantes régénérées à microspores ont les caractéristiques suivantes: elles sont naturellement doublées en diploïdes et leurs perspectives d’application dans l’étude de la génétique et de la sélection d’Osmanthus fragrans sont intéressantes， mais le mécanisme des embryons de microspores naturellement doublés en diploïdes reste à explorer. À l'avenir， nous devrons renforcer la recherche théorique et améliorer le travail des techniques expérimentales， établir un système de culture de microspores stable capable d'obtenir des diploïdes homozygotes， de manière stable et efficace， et améliorer le taux de réussite et l'efficacité de la technologie de sélection d'Osmanthus fragrans. Son intégration organique avec les techniques de sélection traditionnelles en fait un élément important de la sélection conventionnelle.
　　本文转载自
　　桂花树价格 http://m.guihua99.net/m/