[桂花树价格]桂花内生菌的分离及硬菌的筛选
时间：2019/11/5 6:28:06 浏览量：
从选择性的培养基中分离出内生细菌，这些培养基来自茂名市郊种植的桂花种植的小型成熟植物。得了三个内生细菌，五个内生真菌和两个内生放线菌。菌属于芽孢杆菌属，大肠埃希菌属和黄杆菌属，真菌主要是曲霉属和Mucor属，放线菌属属于链霉菌属和诺卡氏菌属。刮刀培养法筛选了两种内生放线菌菌株和一种内生细菌，以强烈拮抗植物核盘菌。物内生菌是指在生命或生命史的某个阶段在细胞间空间或植物组织细胞中生长而不会引起明显疾病症状的微生物。
生细菌是一个非常多样化的微生物群，大量研究表明，内生菌占据着利基，有利于植物的生物防治，它们可以抵抗病虫害[1-4]，并且植物可以促进生长[5，6]]，增加宿主对压力[7]和其他功能的抵抗力。年来，内生细菌的生理作用[8-12]及其作为生物防治资源的潜力[13-15]已逐渐成为国内外研究的热点。花是最丰富的蔬菜，含有蔬菜和维生素。
在中国南部广泛种植。花富含维生素A，维生素C，维生素B，钾，硒等。过敏。对预防心血管疾病，降低癌症风险和促进肠蠕动，促进肠蠕动和保留粪便有益。滑，还能健脾利尿，促进吸收，帮助荨麻疹褪色等功效。物菌核病是一种由巴里氏菌引起的菌核病，宿主范围广，难于控制，损失严重。着生活水平的提高和环境意识的提高，人们对自身健康的关注以及对无公害食品的需求也在增加。此，对低污染作物的生物防治将逐渐取代全部或部分化学药物，而内生细菌的生物防治成为关注的焦点。内外专家对菜籽，柑桔，瓜类等瓜果蔬菜中的菌核病进行了生物防治方面的广泛研究，并取得了一些成果，但对生长期短的植物来源的菌核很少。于内生细菌的分离和拮抗细菌的筛选[16]，该实验分离了茂名郊区大面积种植的内生桂花细菌，并在高水平拮抗内生细菌。见致病菌。选的目的是探索预防和治愈植物菌核的新有效方法，并提供基础理论数据以改善该地区蔬菜的质量。
郊区茂名的花园里，采集到了带有健康甜味的小桂花。病原体是从被感染的桂花的根和叶中分离出来的。白ept培养基中的牛肉奶油：0.5％牛肉提取物，1.0％蛋白ept，0.5％NaCl，1.5％至2.0％琼脂，pH 7.4。入50 mg / L的重铬酸钾抑制真菌生长。培养基I：2.0％可溶性淀粉，0.1％KNO3、0.05％K2HPO4·3H2O，0.05％NaCl，0.05％MgSO4·7H2O，桂花树价格0.001％FeSO4·7H2O，1.5琼脂％至2.0％。pH值7.4。入50 mg / L的重铬酸钾抑制真菌生长。铃薯培养基（PDA）：20％马铃薯提取物，2％蔗糖，1.5％至2.0％琼脂，桂花树价格天然pH。250 U / L的氨苄青霉素的添加抑制了细菌的生长。抗剂测试培养基：牛肉提取物，蛋白ept培养基和20％的小香型花生提取物。将液体培养物添加到琼脂中。上述培养基在121℃下灭菌20分钟。3.1内生菌的分离和纯化将收获的植物用流水冲洗，切成小段，用75％的酒精浸泡3分钟，然后用10％的次氯酸钠浸泡一段时间：茎持续8分钟，根和叶因气孔而比茎大，浸泡5分钟，然后每次在无菌水中浸泡3分钟。洗液是无菌流动的，通常是3到4次。无菌条件下，用适量的PBS缓冲液压碎，摇匀，静置3分钟，然后取0.5 mL上清液涂在分离介质板上，每种材料平行3个。洗液用作对照，并在30°C下培养1周。去不同形式的菌落并散布并划线3-4次，以通过和纯化，显微镜检查和低温坡度保存。/ 3000红色孟加拉溶液），在30°C孵育直至白色菌丝生长后，捕获白色菌丝，并用数个纯种子草皮纯化，并冷冻保存斜率。离的内生细菌和菌核细菌分别在蛋白ept牛肉糊培养基中间隔24小时连续激活3次，因此该菌株处于旺盛的生长时期。内生菌接种在板中间的一侧，并将菌核接种在另外的2cm培养基上。
养在30℃下进行，不将要测试的细菌作为对照，并且在24小时后观察到。液体培养中将作为菌核菌的拮抗剂的内生细菌培养48小时，并且将真菌或放线菌培养6天，然后通过过滤将发酵液灭菌并与菌核菌以浓度混合。20％。细菌在30℃下培养，不使用发酵液作为对照，24小时后观察细胞。
菌鉴定手册。离出的内生菌株被鉴定和分类。
原细菌的鉴定：根据培养的特征，例如菌落和菌核上细菌的形成，结合Koch标准和文献[17]，已经鉴定出病原菌。用培养基培养方法，使用选择培养基通过内生细菌分离出桂花的健康植物，并通过斑块斑纹进行纯化，表1显示了内生细菌在不同组织中的定植。共获得了3种内生细菌，5种内生真菌和2种不同菌落形态的内生放线菌，其数字列于表2，其中xbc-b，xbc-f和xbc-f被发现。花的根和茎。子散开了。验结果表明，同一植物不同部位的内生菌种和内生菌数不同，这是由于每种植物的器官生态位不同所致，从小桂花的根中分离出的内生菌相对芳香。多。菌种类的真菌分离率最高。以看出，在小桂花中发现的内生菌主要是通过土壤或种子传播的。
2.1内生细菌是指根据细菌和菌落的形态（无论它们是否具有鞭毛），参考《伯杰鉴定手册》和《真菌鉴定手册》的第八版，革兰氏染色，生理生化反应等最初对细菌进行了鉴定和分类，结果列于表2中。）菌落的特征：菌落在PDA支架上呈白色，呈放射状，疏松地附着在支架表面，呈白色。圆角，边缘锐利，24小时后延伸至整个培养皿。2）菌丝体的形态：在显微镜下，菌丝体是无色的，分支是垂直的，有水平的间隔。后期，小白点可以弯曲并形成菌核。3）菌核的特征：最初形成的菌核为乳白色，然后微黄色，最后变为褐色，表面光滑，呈球形或椭圆形，有时2到4个菌核粘在一起，培养基上菌核的直径为0. 5到1， 0毫米4）致病性：接种菌丝2至3天后，茎的基部颜色为浅棕色，白色和丝状。围环境中，接种菌核5天后出现相同的症状.6至8天后，植物茎基部腐烂，整个植物死亡，但目击者没有。据上述病原学特征，病原细菌，分离的病原体的形态和培养特征以及文献[12]描述了白垩病及其致病因素，并通过起源为Sclrotium rilfsii Accardo。
离和纯化的内生细菌受到茄红枯萎菌的攻击，一些结果如图1、2、3和4所示。果显示，其中有2株放线菌和1株细菌内生菌对茄属根瘤菌有强力抑制作用，病原体拮抗药为链霉菌和Noka。卡氏菌，芽孢杆菌。
原菌在含有三种内生发酵液的三种平板培养基中的生长表明，病原菌在诺卡氏菌发酵液培养中发育良好，其抑制作用不明显，但在另一种情况。生发酵液的生长受到抑制，菌落出现较晚，菌丝明显减少。指出，诺卡氏菌菌株对菌核菌的抑制作用可能是由于营养或空间的竞争性抑制而引起的，而链霉菌和芽孢杆菌这两种内生菌的抑制作用主要是由于其代谢产物。用牛肉蛋白ept牛肉提取物，优质培养基I和马铃薯培养基，从桂花的根，茎和叶中分离出内生细菌。有3种内生细菌和5个菌株。生真菌，2个内生放线菌。培养筛选内生拮抗细菌表明，有2株放线菌和1株分离的内生细菌对菌核病菌具有较强的拮抗作用，其中2种可能是细菌引起的。谢物。过菌落和形态特征，鞭毛的存在与否，革兰氏染色，生理生化反应鉴定了十种内生细菌菌株，细菌为芽孢杆菌，大肠杆菌和黄杆菌。菌主要是曲霉菌和毛霉菌，放线菌是链霉菌和诺卡氏菌。于菌落和菌核形成等培养性状的特征，根据科赫标准将病原菌鉴定为Sclrotium rilfsii Accardo。内生细菌中，链霉菌，诺卡氏菌和芽孢杆菌是菌核拮抗剂。
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生细菌是一个非常多样化的微生物群，大量研究表明，内生菌占据着利基，有利于植物的生物防治，它们可以抵抗病虫害[1-4]，并且植物可以促进生长[5，6]]，增加宿主对压力[7]和其他功能的抵抗力。年来，内生细菌的生理作用[8-12]及其作为生物防治资源的潜力[13-15]已逐渐成为国内外研究的热点。花是最丰富的蔬菜，含有蔬菜和维生素。
在中国南部广泛种植。花富含维生素A，维生素C，维生素B，钾，硒等。过敏。对预防心血管疾病，降低癌症风险和促进肠蠕动，促进肠蠕动和保留粪便有益。滑，还能健脾利尿，促进吸收，帮助荨麻疹褪色等功效。物菌核病是一种由巴里氏菌引起的菌核病，宿主范围广，难于控制，损失严重。着生活水平的提高和环境意识的提高，人们对自身健康的关注以及对无公害食品的需求也在增加。此，对低污染作物的生物防治将逐渐取代全部或部分化学药物，而内生细菌的生物防治成为关注的焦点。内外专家对菜籽，柑桔，瓜类等瓜果蔬菜中的菌核病进行了生物防治方面的广泛研究，并取得了一些成果，但对生长期短的植物来源的菌核很少。于内生细菌的分离和拮抗细菌的筛选[16]，该实验分离了茂名郊区大面积种植的内生桂花细菌，并在高水平拮抗内生细菌。见致病菌。选的目的是探索预防和治愈植物菌核的新有效方法，并提供基础理论数据以改善该地区蔬菜的质量。
郊区茂名的花园里，采集到了带有健康甜味的小桂花。病原体是从被感染的桂花的根和叶中分离出来的。白ept培养基中的牛肉奶油：0.5％牛肉提取物，1.0％蛋白ept，0.5％NaCl，1.5％至2.0％琼脂，pH 7.4。入50 mg / L的重铬酸钾抑制真菌生长。培养基I：2.0％可溶性淀粉，0.1％KNO3、0.05％K2HPO4·3H2O，0.05％NaCl，0.05％MgSO4·7H2O，桂花树价格0.001％FeSO4·7H2O，1.5琼脂％至2.0％。pH值7.4。入50 mg / L的重铬酸钾抑制真菌生长。铃薯培养基（PDA）：20％马铃薯提取物，2％蔗糖，1.5％至2.0％琼脂，桂花树价格天然pH。250 U / L的氨苄青霉素的添加抑制了细菌的生长。抗剂测试培养基：牛肉提取物，蛋白ept培养基和20％的小香型花生提取物。将液体培养物添加到琼脂中。上述培养基在121℃下灭菌20分钟。3.1内生菌的分离和纯化将收获的植物用流水冲洗，切成小段，用75％的酒精浸泡3分钟，然后用10％的次氯酸钠浸泡一段时间：茎持续8分钟，根和叶因气孔而比茎大，浸泡5分钟，然后每次在无菌水中浸泡3分钟。洗液是无菌流动的，通常是3到4次。无菌条件下，用适量的PBS缓冲液压碎，摇匀，静置3分钟，然后取0.5 mL上清液涂在分离介质板上，每种材料平行3个。洗液用作对照，并在30°C下培养1周。去不同形式的菌落并散布并划线3-4次，以通过和纯化，显微镜检查和低温坡度保存。/ 3000红色孟加拉溶液），在30°C孵育直至白色菌丝生长后，捕获白色菌丝，并用数个纯种子草皮纯化，并冷冻保存斜率。离的内生细菌和菌核细菌分别在蛋白ept牛肉糊培养基中间隔24小时连续激活3次，因此该菌株处于旺盛的生长时期。内生菌接种在板中间的一侧，并将菌核接种在另外的2cm培养基上。
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原细菌的鉴定：根据培养的特征，例如菌落和菌核上细菌的形成，结合Koch标准和文献[17]，已经鉴定出病原菌。用培养基培养方法，使用选择培养基通过内生细菌分离出桂花的健康植物，并通过斑块斑纹进行纯化，表1显示了内生细菌在不同组织中的定植。共获得了3种内生细菌，5种内生真菌和2种不同菌落形态的内生放线菌，其数字列于表2，其中xbc-b，xbc-f和xbc-f被发现。花的根和茎。子散开了。验结果表明，同一植物不同部位的内生菌种和内生菌数不同，这是由于每种植物的器官生态位不同所致，从小桂花的根中分离出的内生菌相对芳香。多。菌种类的真菌分离率最高。以看出，在小桂花中发现的内生菌主要是通过土壤或种子传播的。
2.1内生细菌是指根据细菌和菌落的形态（无论它们是否具有鞭毛），参考《伯杰鉴定手册》和《真菌鉴定手册》的第八版，革兰氏染色，生理生化反应等最初对细菌进行了鉴定和分类，结果列于表2中。）菌落的特征：菌落在PDA支架上呈白色，呈放射状，疏松地附着在支架表面，呈白色。圆角，边缘锐利，24小时后延伸至整个培养皿。2）菌丝体的形态：在显微镜下，菌丝体是无色的，分支是垂直的，有水平的间隔。后期，小白点可以弯曲并形成菌核。3）菌核的特征：最初形成的菌核为乳白色，然后微黄色，最后变为褐色，表面光滑，呈球形或椭圆形，有时2到4个菌核粘在一起，培养基上菌核的直径为0. 5到1， 0毫米4）致病性：接种菌丝2至3天后，茎的基部颜色为浅棕色，白色和丝状。围环境中，接种菌核5天后出现相同的症状.6至8天后，植物茎基部腐烂，整个植物死亡，但目击者没有。据上述病原学特征，病原细菌，分离的病原体的形态和培养特征以及文献[12]描述了白垩病及其致病因素，并通过起源为Sclrotium rilfsii Accardo。
离和纯化的内生细菌受到茄红枯萎菌的攻击，一些结果如图1、2、3和4所示。果显示，其中有2株放线菌和1株细菌内生菌对茄属根瘤菌有强力抑制作用，病原体拮抗药为链霉菌和Noka。卡氏菌，芽孢杆菌。
原菌在含有三种内生发酵液的三种平板培养基中的生长表明，病原菌在诺卡氏菌发酵液培养中发育良好，其抑制作用不明显，但在另一种情况。生发酵液的生长受到抑制，菌落出现较晚，菌丝明显减少。指出，诺卡氏菌菌株对菌核菌的抑制作用可能是由于营养或空间的竞争性抑制而引起的，而链霉菌和芽孢杆菌这两种内生菌的抑制作用主要是由于其代谢产物。用牛肉蛋白ept牛肉提取物，优质培养基I和马铃薯培养基，从桂花的根，茎和叶中分离出内生细菌。有3种内生细菌和5个菌株。生真菌，2个内生放线菌。培养筛选内生拮抗细菌表明，有2株放线菌和1株分离的内生细菌对菌核病菌具有较强的拮抗作用，其中2种可能是细菌引起的。谢物。过菌落和形态特征，鞭毛的存在与否，革兰氏染色，生理生化反应鉴定了十种内生细菌菌株，细菌为芽孢杆菌，大肠杆菌和黄杆菌。菌主要是曲霉菌和毛霉菌，放线菌是链霉菌和诺卡氏菌。于菌落和菌核形成等培养性状的特征，根据科赫标准将病原菌鉴定为Sclrotium rilfsii Accardo。内生细菌中，链霉菌，诺卡氏菌和芽孢杆菌是菌核拮抗剂。
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