[桂花树价格]与桂花干烧特性相关的SSR和SRAP标记分析
时间：2019/11/11 6:28:28 浏览量：
使用了由141个F2代中华曲霉和对A1和A3病毒具有抗性的变种组成的种群，亲本DNA被用来提供大量的桂花感官和对玉米的抗性。病，104对SSR引物和320对。滤SRAP引物。们分析了OTL及其与干烧特性相关的结合关系：获得了两个与桂花干烧特性相关的OTL，以及三个与这两个OTL相关的标记，其中A29-标记890和E6-400与其最接近的OTL位点之间的结合距离分别为1.5cM和7.1cM。为大桂花抗干燥燃烧性状的分子辅助选择奠定了基础。
花（Brassica carapestris L，ssp，pekinensis）原产于中国，具有悠久的栽培历史，资源丰富，种类繁多。的种植面积和市场占有率居蔬菜之首，是大多数中国人的“家常菜”。烧是一种生理疾病：在非洲菊开花期，由于气候干旱，土壤钙缺乏，盐分或施肥过多，浇水不规律等原因。常出现桂花的产量和质量。产生了相当大的影响。花的品种和材料不同，干烧边的特性也不同。些品种在球外不可见，只有球的内叶出现，桂花树价格从而导致后期腐烂：有些品种只出现在球的边缘，球内的表现n'不严重，这称为干烧边。于干烧，许多品种严重影响了市场地位。择耐干烧的选择品种已成为解决该问题的关键。前，对桂花抗干燥性心脏的研究主要集中在致病机理（4），疾病的表现和室内识别方法等方面，分子生物学研究仅涉及孙秀峰等技术。AFLP用于相关性分析。该实验中，以通过将A67热干品种与抗A53干烧品种杂交获得的F2代为材料，研究了A53的干烧特性。花由SSR和SRAP标记进行。项研究将为选择抗击桂花的大型品种奠定分子基础。桂花干枯病品种A67为母本，以抗枯萎病品种A53为母本，通过杂交和杂交获得F1代。过自动交叉F1代来生成F1代。质培养方法在育苗箱中播种F1和F2代的种子，当它们有两片真叶并每盆种植一株时，将它们移植到8 cm×8 cm的营养钵中。钙ver石用作培养基质，无土栽培采用Hoagland改良的无钙营养液，即Ca（NO 3）2·4H 2 O去除原始配方，将其他含氮成分从原始营养液中增加大约1倍。的时间，总量与原始营养液基本相同：NH4NO3 2mmol·L-1，KN0310mm01，桂花树价格L-1，NH4H2PO42mmol·L-1和其他成分与溶液相同有营养的霍格兰。移植后50天研究了该疾病的水平。据相关文献，对干式燃烧状态的研究已略作修改。烧条件分为6类（表1），对F2代组的206株植物进行了病害水平分析。据干性胃灼热症状的程度计算干性心脏病指数，并根据下面列出的抗性分类标准对抗性水平进行排名。206个F 2世代种群中随机选择141株植物的DNA提取，洗涤并干燥后称重2.3至2.5 g的叶子。过参考Clark方法提取DNA模板。过选择8种干烧A67品种和干烧A53品种的引物进行选择，并将两个亲本的DNA等量混合以形成抗燃烧DNA库。燥和干燥防燃烧。
过两次重复测试后，获得了多态性引物，并对F2代种群的单株植物进行了分析。SSR引物序列的SSR和SRAP分析包括23对锚定的SSR引物和81对EST-SSR引物。中，锚定的SSR引物是指国际上公开的引物序列（表2），并且EST-SSR引物是根据NCBI数据库中大桂花的相关EST序列设计的。SPRA引物是国际上公开的序列，实验中使用的引物序列在表3中显示。20μLPCR反应系统中，使用2μL的10×Taq缓冲液，1μL包括10 mmol.L -1 dNTP 1.6、10 M和1μL下游引物，30 ng模板DNA和0.2μL酶2.5 UTaq。EST-SSR扩增反应步骤是指以下方法和其他方法：在94°C下预变性4分钟，在94°C下变性45 s，复性1分钟，通过PCR确定复性与不同引物对的关系，在72℃下延伸1分钟30秒循环：在72℃下延伸7分钟。
持在4°C下。RAP反应过程基于雷健和刘军的变性温度变化方法：在94°C下变性3分30秒。5个循环在94℃下30秒，35℃下30秒和72℃下1分钟30秒，然后将复性温度升高到50℃下45秒。后，进行35个循环，最后在4°C保持至少10分钟。增反应在DNA引擎PCR机上进行。
如，标记M6-400表示引物的名称是M6，并且引物的组合已经获得了400bp长的片段。OTL面额方法是指McCuuch等人的方法。水稻上，根据“ OTL +性状+ OTL号”，其中OTL以小写的“ q”开头，并且该行用英语缩写表示。果同一条染色体上有多个具有不同位点的OTL，则添加数字1、2、3，依此类推。染色体。用Map maker / Exp3.0软件计算交换值LOD≥3.0，最大遗传距离为50 cM，通过Kosambi转换和链接已建立。用Windows0TL Cartographer V2.5执行OTL复合间隔映射，并使用大于2.0的LOD值作为OTL阈值进行分析。母接种的结果：大多数A67妇女的范围从0到3，平均疾病得分为86.67。A53的大多数儿童为5至9岁，平均疾病指数为33.33。测试中，F1代的鉴定结果都是可能的，平均疾病指数为65。一结果与Tan Qimeng等人的描述一致。父母对疾病的抵抗力不同时，F1疾病抵抗力就在两个父母之间。有一些母亲倾向于继承的现象。离出的F代植物的鉴定结果显示在图10中，等级10，等级1、34、3、56、5、60和39、39。有9个等级的7个菌株，总共有9个等级。206株如图1所示，干烧边缘的疾病进展表明F2代种群之间存在明显的分离，总体趋势是在父母之间。行正态分布测试：峰度参数为0.4846，不对称参数为-0.8791，本质上是正态分布； A53具有抗干烧性，但不具有一个简单的隐性关系，表现出数量特征。传的典型特征完全符合OTL分析对干桂花对干烧的抵抗力的要求。
用一对包含亲本及其F1代的DNA分析池作为104对SSR引物的模板对（图2，1对3条泳道的引物，按照P1的顺序，分别为P2和F1）和320对SRPA引物对（图3.通过4个泳道对一对引物进行多态性筛选，前2个泳道为P2，第一个泳道为P2。过反复验证，25对引物在筛选中显示出稳定且清晰的多态性，即M6，M8，M10，M13，M18，M19，M20，E6，E32，E36，E61，E64。E71和S6，S7，S9，S10，S15，S16，S23，S25，S26，S27，S29，S30，其中M6，M8，M10，M13，M18，M19和M20已映射在地图上。因组A在国际上发行，并分布在桂花大图的每个连锁群上，以构建桂花图。为锚定标记使用上面选择的引物对，对141个F2代群体进行SSR和SRAP分析，获得了32个显示出显着差异的多态性标记，即M6-150，M8-200，M10-150，M13-1000。M18-100，M19-700，M20-800，E6-400，E6-1500，E32-300，E36-300，E61-1000，E64-240，E64-1000，E71-300和S6-180，S7 -900，S9-500，S10-280，S15-160，S16-180，S16-260，S23-330，S25-120，S26-180，S27-150，S27-180，S29-250，S29-410 S29-890，S29-1000，S30-200。这些引物中，一些在几乎所有抗病植物中都有条带，例如E6，M19和S29，一些主要在易感植物中例如S26和M6，其他则具有抗病性。
植物在地带深处，而在敏感植物（例如E61）中则浅。果，一些标记可能是抗病基因的连锁标记。用Mapmaker / Exp3.0软件构建链接组，使用Windows OTL Cartographer V2.5用于复合间隔映射方法来定位OU，总共生成了两个链接组。
果表明，当LOD值> 3时，可以检测到它。干烧性状相关的两个OTL位点，临时命名为qt-c2-1和qt-c2-2，位于连锁群LG2上，位点加性效应的加性效应表现出加性效应。者均为负值，改善的耐干烧性的效果以协同加和效应表示，效果值分别为-1.16和-1.55，贡献分别为7.8％和16.5％（表4）。锁分析显示。有三个标记M19-700，E6-400和S29-890链接到两个OTL位点（图6），其中E6-400，M19-700和OTLqt-c2-1之间的遗传距离为7。1 cM。
OTLqt-c2-2之间的遗传距离为2.1 cM，S29-890与主要OTLqt-c2-2之间的遗传距离为1.5 cM。Lim等人的研究表明，M19-700（即BrFL1c1）已作为锚定SSR标记定位到基因组A参考图上。花的10号染色体。物心脏干燥是由钙缺乏引起的生理疾病。1946年Shafer等人发表第一份报告以来，国内外专家对这种疾病的病因和发病机理进行了广泛的研究，并取得了长足的进步。国研究人员对桂花干与气象因素，土壤盐分，钙营养和分布之间的关系以及补钙对玉米的影响进行了广泛的系统研究。造花的叶子。现大的桂花能抵抗干烧。病与钙的吸收之间在基因型上存在差异。是，其发病机理是由各种环境因素引起的。Dickson的研究结果表明，不同的甘蓝基因型在对抗干性胃灼热方面存在一些差异：在不同的材料和不同的年份之间，窄遗传力为14％至49％，遗传率从64％提高到77％。受环境条件的影响很大。前，干枯病的鉴别方法通常是用幼苗营养液来培养的，在苗期干燥的桂花主要表现为干斑和边缘。边缘的干燥边缘的大小用作识别的基础。于品种和干烧材料的抗性差异很大，因此在播种期叶缘的干烧大小有时与田间作物的干烧大小不一致。本实验中，使用F2代组，由两组在田间燃烧水平上有显着差异的高代自交系组成，使用Hoagland增强营养液鉴定F2代种群。鉴别桂花的大干烧边的方法。地上耕种时，在播种阶段对父母的识别与田间表现一致。前，国内外有关桂花干特性相关分子水平的报道很少。用干边缘指数平均值和染色指数作为干边缘指数构建遗传图谱，获得了与干烧边缘相关的四个OTL位点，它们位于四组上。络。本实验中，利用大桂花F2代群体对干烧构建了遗传连锁图谱，获得了两个与桂花干烧性状相关的OTL基因座。同一联络小组中。OT1xtt-c2-2的贡献率为16.5％，最近的连接标记之间的距离仅为1.5 cM。实验中选择的25对引物是锚定的SSR标记，这些标记已被映射到A. M19基因组的参考图，即BrFLel，位于连接组2中。Lim等人的研究中，作者将在实验中找到结合基团的标记。应于基因组A的参考图谱，染色体对应于10号染色体。来的目标是丰富和改善桂花干结合图谱，增加SSR或SSR引物的数量。
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过两次重复测试后，获得了多态性引物，并对F2代种群的单株植物进行了分析。SSR引物序列的SSR和SRAP分析包括23对锚定的SSR引物和81对EST-SSR引物。中，锚定的SSR引物是指国际上公开的引物序列（表2），并且EST-SSR引物是根据NCBI数据库中大桂花的相关EST序列设计的。SPRA引物是国际上公开的序列，实验中使用的引物序列在表3中显示。20μLPCR反应系统中，使用2μL的10×Taq缓冲液，1μL包括10 mmol.L -1 dNTP 1.6、10 M和1μL下游引物，30 ng模板DNA和0.2μL酶2.5 UTaq。EST-SSR扩增反应步骤是指以下方法和其他方法：在94°C下预变性4分钟，在94°C下变性45 s，复性1分钟，通过PCR确定复性与不同引物对的关系，在72℃下延伸1分钟30秒循环：在72℃下延伸7分钟。
持在4°C下。RAP反应过程基于雷健和刘军的变性温度变化方法：在94°C下变性3分30秒。5个循环在94℃下30秒，35℃下30秒和72℃下1分钟30秒，然后将复性温度升高到50℃下45秒。后，进行35个循环，最后在4°C保持至少10分钟。增反应在DNA引擎PCR机上进行。
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用一对包含亲本及其F1代的DNA分析池作为104对SSR引物的模板对（图2，1对3条泳道的引物，按照P1的顺序，分别为P2和F1）和320对SRPA引物对（图3.通过4个泳道对一对引物进行多态性筛选，前2个泳道为P2，第一个泳道为P2。过反复验证，25对引物在筛选中显示出稳定且清晰的多态性，即M6，M8，M10，M13，M18，M19，M20，E6，E32，E36，E61，E64。E71和S6，S7，S9，S10，S15，S16，S23，S25，S26，S27，S29，S30，其中M6，M8，M10，M13，M18，M19和M20已映射在地图上。因组A在国际上发行，并分布在桂花大图的每个连锁群上，以构建桂花图。为锚定标记使用上面选择的引物对，对141个F2代群体进行SSR和SRAP分析，获得了32个显示出显着差异的多态性标记，即M6-150，M8-200，M10-150，M13-1000。M18-100，M19-700，M20-800，E6-400，E6-1500，E32-300，E36-300，E61-1000，E64-240，E64-1000，E71-300和S6-180，S7 -900，S9-500，S10-280，S15-160，S16-180，S16-260，S23-330，S25-120，S26-180，S27-150，S27-180，S29-250，S29-410 S29-890，S29-1000，S30-200。这些引物中，一些在几乎所有抗病植物中都有条带，例如E6，M19和S29，一些主要在易感植物中例如S26和M6，其他则具有抗病性。
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