[桂花树价格]B7耐盐细菌菌株的筛选及其在桂花中的应用
时间：2019/11/17 6:33:11 浏览量：
本文回顾了一种可提高作物耐盐性的生长细菌的筛选和应用。离和纯化沿海滩的盐碱土壤中存在的微生物，并用耐盐性和除盐试验筛选从根际分离出的微生物。得了具有高耐盐性的，耐盐和促进B7活性的细菌。定了16S rDNA，其生理生化特性和促进生长的能力，以及B7通过培养皿法和发酵法改善了桂花耐盐性的能力。栽栽培法。果表明，该菌株的盐度为6％，B7制得的微生物剂能显着提高桂花在盐胁迫下的耐盐性，减缓盐害，增加生物量，促进桂花的生长。着社会的发展和人口的增长，人口对耕地资源的需求也在增加。壤盐渍化是通过毛细水使土壤底部或地下水中的盐分上升至地表，而盐分蒸发后会积聚在土壤中的过程。溶盐在土壤表面累积的现象或过程，也称为盐碱化。了由于海水浸渍导致沿海地区盐碱化以外，干旱和半干旱地区基础农业的发展也是造成次生土壤盐碱化的重要原因[1-2] 。
前，世界上50％的灌溉土地受到不同的盐分胁迫。国盐渍土（或盐碱土）分布广泛，幅员广，种类繁多，总面积约1亿hm2，濒危面积逐年增加。何改善和利用大片盐碱地，以及保护和增强重要农作物抗盐胁迫的能力，是国际社会亟需解决的重要科学技术问题。-5。
前，主要的生物改良方法包括高盐，甜菜，向日葵和耐盐植物等耐盐植物，Ta柳、，柏，紫穗槐的栽培和种植。也有关于转基因耐盐植物的研究。种方法是长期的，昂贵的，不为社会所接受和认可的。际微生物是在植物根的土壤中生长和繁殖的微生物，例如细菌，放线菌和真菌。多数根际微生物对植物无害或促进其生长，其中一些还具有固氮，磷增溶，桂花树价格植物生长激素产生和铁载体的功能。
诱导植物抗性。用根际微生物提高盐碱培养中作物的耐盐性具有以下特点：投资少，见效快，效率高。此，研究者对根际微生物的耐盐性功能活性进行了广泛的研究。沿海土壤中分离和筛选耐盐菌株可用于提高作物的耐盐性，同时，为耐盐基因的克隆和转基因耐性植物的构建奠定了基础。文综述了耐盐和促生长菌株B7在促进盐胁迫培养物的萌发和生长中的应用，以及微生物制剂的制备方法。寻找应用菌株B7促进耐盐生长提供参考。7月6日，从江苏盐城海滩沿线的盐碱土壤中采集了15个土壤样品，并将每1g土壤样品悬浮在100ml中。菌水稀释105倍。用LB培养基进行筛选，并使用NaCl浓度为2％，4％，6％，8％和10％的NA培养基筛选耐盐菌株。取0.1 mL稀释的土壤溶液到两种中型平板上，在30°C下孵育2-3天，选择在6％盐下生长良好的菌落，并在重复条纹后储存。选了耐盐的B7菌株。盐菌株B7是耐盐的并且延长寿命。佳生长温度为30°C。落小，白色，凸，边缘锋利，光滑湿润，不透明，是有氧异养细菌。B1菌株的平板培养菌落如图1所示。菌分子遗传学的分类和鉴定。B7菌株DNA为模板，以通用16S rDNA引物为引物，扩增16S rDNA片段。扩增的片段直接进行序列测定。序结果被导入到NCBI网站的BLAST程序中进行比较：该菌株的16S rDNA序列具有最高的同源性，而该菌株与玉米芽孢杆菌的16S rDNA序列在GenBank基因库的同源性达到100％。过DNAMAN6.0对GenBank中芽孢杆菌16S rDNA序列的遗传进化分析表明，菌株B7的16S rDNA与巨大芽孢杆菌具有最高的同源性。此，最初可以确定该菌株是芽孢杆菌属的巨大芽孢杆菌。理生化测定。关耐盐菌株的生理和生化测定，请参阅“共同细菌系统鉴定手册”。初被鉴定为革兰氏阳性，痰反应阳性，能够水解淀粉和葡萄糖，能够液化明胶；伏特脉冲试验阴性，甲基红色反应阴性，硫化氢阴性，柠檬酸盐试验阴性。据上述确定菌株的遗传特性和生理生化特性的结果，证实了选自盐碱土壤的促进生长和耐盐的B7菌株是巨大芽孢杆菌。分离和纯化的耐盐菌株B7悬浮液转移至具有不同盐浓度的相同液体培养基中，在30℃和130rpm下搅拌并观察到生长。24小时后，观察到悬浮液。600 nm波长处的吸光度可以确定细菌的耐盐性。盐性结果如图2所示。以看出，耐盐菌株B7对氯化钠具有很高的适应性：该菌株在没有盐的情况下不会自溶，并且仍然可以盐浓度达到6％时保持不变。细菌浓度可以在0至6％的盐浓度下培养，最佳盐浓度为4％至6％。出在固体LB平板上生长48小时的耐盐菌株B7的单个菌落，并接种在250ml LB液体培养基中，在30℃和130rpm下搅拌48小时后，细胞长大了。长期间，在无菌离心管中以12，000 rpm离心12分钟，弃去上清液，收集细胞，用无菌水洗涤细胞两次，并调节吸光度。
胞用无菌水冲洗。为生物杀真菌剂，其在0.5至0.6之间。适量的未经处理的桂花种子放入烧杯中进行消毒，先将其用75％的乙醇（无籽）浸泡7分钟，然后倒入乙醇溶液，然后加入现有的0.1％氯化汞浸泡1分钟。后，倒入氯化汞溶液，最后用无菌水洗涤3次以备使用。备适量的培养皿，将棉花铺在培养皿底部，盖上盖子并消毒，准备200 mmol / L的氯化钠溶液，桂花树价格消毒并放在一旁。
为实验的一部分，实施了四种处理：对照组，耐盐菌株组，硫胁迫组和盐胁迫+耐盐菌株组。中，应激组，盐，耐盐菌株组加200 mmol / L NaCl溶液（无棉绒），对照组和耐盐菌株组加蒸馏水重复3次。每个培养皿中放置40个种子（将空白对照组和盐胁迫组的种子在无菌水中浸泡6小时，将耐盐菌株组和盐菌株组的种子用细菌B7溶液将盐+应力+浸泡6小时）。在各个阶段完成的上述盒子在25℃下在光培养箱中放置7天（黑暗培养的前3天，最后4天是12小时的光培养和12小时的培养）。人文化）。验结束时，记录桂花种子的发芽率，鲜重和干重。验结果示于图3和表1。果表明，耐盐B7 +菌株的胁迫处理组的种子发芽率和鲜重分别为1.25倍。盐胁迫组高1.23倍，表明耐盐B7菌株对桂花种子具有明显的耐盐作用。桂花种子在温水中浸泡一晚后，将其浸入75％乙醇溶液（无种子）中1分钟，然后倒入，然后加入0.1％氯化汞1分钟，然后倒入并使用灭菌细菌。蒸馏水洗涤3次并放在一旁。盆栽的基质与营养土壤和ver石（体积比为4：1）混合，在121°C下灭菌1 h，冷却并置于培养皿（10 cm x 10 cm x 10 cm）中），每个锅中装满200克。别定义了白色对照（无盐胁迫），盐胁迫和盐胁迫+ B7菌株，先将经过胁迫+ B7菌株处理的种子浸入B7菌株中6 h，控制和盐胁迫控制种子。无菌水中浸泡6小时，共5次。每个盆中种植三株盆栽的桂花种子，然后对照组用无菌水，盐胁迫和盐胁迫菌株+ B7处理，并与200 mmol NaCl溶液/ L，每周浇水一次。余时间在无菌水中搅拌。苗后，计算出发芽率和出苗率，然后每盆养一株苗，经过一个月的生长指标，如总根长，总投影面积，总面积测量根，平均根直径和根尖数，以及葡萄糖和赖氨酸。理指标，例如酸含量（表2和3）。出已经在固体LB平板上生长48小时的单个耐盐B7菌株菌落，并将其接种在250ml LB液体培养基中，并在30℃，130rpm下生长48小时。到细胞在对数生长期生长，在无菌离心管中以12，000 rpm离心12分钟，弃去上清液，收集细胞并用水洗涤两次。菌水，然后用无菌水调节吸收度。0.6，即促进植物耐盐性的试剂。本文中，我们研究了B7耐盐生长启动子菌株的分离，筛选，鉴定和耐盐分析，确定了遗传特征和性状。理生化确定该菌株为巨大芽孢杆菌。花种子在盐胁迫下的萌发和桂花的耐盐碱作用表明，该菌株的盐度为6％，耐B7菌株制备的微生物制剂盐可能在盐胁迫下显着。高桂花的耐盐性，减缓盐分的破坏，增加生物量，促进甜齿桂花，帮助提高桂花的耐盐性并减少盐分使用化肥。此，该微生物剂具有广阔的应用前景。
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前，世界上50％的灌溉土地受到不同的盐分胁迫。国盐渍土（或盐碱土）分布广泛，幅员广，种类繁多，总面积约1亿hm2，濒危面积逐年增加。何改善和利用大片盐碱地，以及保护和增强重要农作物抗盐胁迫的能力，是国际社会亟需解决的重要科学技术问题。-5。
前，主要的生物改良方法包括高盐，甜菜，向日葵和耐盐植物等耐盐植物，Ta柳、，柏，紫穗槐的栽培和种植。也有关于转基因耐盐植物的研究。种方法是长期的，昂贵的，不为社会所接受和认可的。际微生物是在植物根的土壤中生长和繁殖的微生物，例如细菌，放线菌和真菌。多数根际微生物对植物无害或促进其生长，其中一些还具有固氮，磷增溶，桂花树价格植物生长激素产生和铁载体的功能。
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