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[桂花树价格]西葫芦夏季温室桂花花叶病毒病的定期发生及防虫网的防治效果

时间:2019/11/20 6:31:24 浏览量:
  
  为了探讨西葫芦温室中的桂花花叶病毒病的发生以及蚊帐隔离瓜的防治对病害的影响,定点调查2014年和2015年在山东省济南市进行了田间和室内PCR。果表明,在夏季温室的夏季生长季节,西葫芦在4月中旬开始出现。5月底,中毒率已逐渐增加到30%左右。花病毒病的发生与瓜的密度密切相关。瓜的密度达到一定水平后,出现西葫芦植物。甜瓜快速生长之后,西葫芦菌株的比率也增加了。4月中旬开始出现有毒瓜类,随后的中毒率逐渐增加,到5月底达到3611%至4556%。
  100目昆虫网隔离西葫芦植物可以降低西葫芦植物的中毒率。研究可为科学预防和控制日光温室西葫芦病毒病提供理论依据。助项目:社会福利产业(农业)专项(编号:)。者简介:毛小红(1985-),山东烟台女子,植物病毒防治研究室主任。话:(0531)电子邮件:@qqcom。讯作者:张长生,硕士,研究员,主要研究植物病虫害的防治和防治技术。话:(0531);电子邮件:zhangansheng2003 @ 163com。瓜花叶病毒(CMV)属于Bromoviridae家族的Cucumovirus属。病毒具有广泛的宿主,可以被感染,包括葫芦科,茄科和十字花科。1000多个寄主植物,包括豆类[1-2]。

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  染后,寄主植物表现出矮化,花叶病和萎黄病,以及斑点,静脉和过敏性坏死等症状。从1916年CMV被确认为桂花花叶病的病原体以来,由于它的通用性和广泛性,它已成为世界上最大,研究最多的RNA病毒之一。损坏的严重程度。3-4]。花花叶病毒病主要是通过非持久性蚜虫在野外传播,例如棉蚜和桃蚜,这些蚜虫的寄主范围广泛,在西葫芦和其他蔬菜中也很严重。为桂花花叶病毒病的传播提供了必要条件[5]。前,山东省主要蔬菜种植区的温室大面积桂花花叶病毒病严重危害严重,给生产造成了严重后果。全地夏季花园西葫芦。前,国内外专家正在研究桂花花叶病毒的生物学特性,菌株分化和综合防治技术[8-10],并正在研究桂花叶病毒的传播。

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  花新疆。征[11],但是没有关于桂花叶病毒在温室中传播的报道。研究分析了山东省温室西葫芦中桂花病的发生,发病与瓜子种群动态的关系。cut对病毒病的防治作用为科学预防西葫芦病毒病提供理论依据。试地点是山东省济南市历城区东家镇张家村的西鲁鲁日光温室。验面积为0067 hm2,Xilulu品种在F1中表现出色。花花叶病毒病的调查和定植时间为2014年3月4日,2015年3月12日和2015年9月4日。距为60 cm×100 cm,生长很好。TP600PCR仪器(日本TaKaRa); RXZ-280D-LED照明保温箱(宁波江南仪器厂);低温冷冻离心机5804R(德国埃彭多夫);凝胶成像仪(Alpha Innotech,美国); DYY-6C(北京六邑仪器厂)电泳,25〜1000μL移液器(德国埃彭多夫),MDF-U4086S冰箱在80°C(日本三洋),MLS-3020高压釜(日本三洋),HD-920成立超净(哈尔滨东联电子科技发展有限公司); MDF-U4086S -80°C冰箱(日本SANYO公司)。物RNA提取试剂盒[天健生物技术(北京)有限公司,目录号:DP432];逆转录试剂盒[天健生物技术(北京)有限公司,目录号:KR107]; Masterkix PCR Taq PCR [天根生物化学技术(北京)有限公司,目录号:KT201]; TRIzol(美国Invitrogen); DL2000Marker(ProbeGene);氯仿,异丙醇,无水乙醇(国家医药集团试剂有限公司);圆角(浙江省台州市路桥区东农防虫网厂,改制成西葫芦农作物网的100 cm×100 cm×100 cm的防虫网) 。部进行蚜虫RNA提取:将蚜虫放入15 mL离心管中,在液氮中冷却,然后用小坩埚均匀研磨;在室温下加入250μlTRIzol试剂5分钟,并加入50μl氯仿混合物[三氯甲烷:异戊醇(体积比)= 24:1],搅拌3分钟,在10°C下离心4分钟12分钟。
  °C,转移至上清液(约125μL)。入等体积的异丙醇(预冷至-20°C),在室温下放置10分钟(夏季在-20°C的冰箱中预冷30分钟),在10°C下离心C在4°C下放置12分钟,弃去上清液,添加70%的预冷乙醇(250μL),在4°C下以12,000 rpm离心5分钟,然后添加8μL不含RNase的ddH2O。醇。物基因组RNA的提取:西葫芦叶在液氮中压碎;每个匀浆器每50-100 mg匀浆组织中加入1 ml RZ裂解液;将样品在室温下放置5分钟,以产生核酸。白质复合物被完全分离,在4℃,12,000 rpm下离心5分钟,然后除去上清液,并转移到新的无RNase的离心管中。
  入200μL氯仿,盖上管盖,剧烈摇动15 s,在室温下静置3分钟,以1000°C,12000 rpm离心1分钟,缓慢添加5倍体积无水乙醇,充分混合沉淀:将所得溶液和沉淀物一起转移至吸附塔CR3中,在4°C下以12,000 rpm离心30 s,收集管被丢弃,CR3被放置在吸附柱的收集管中。CR3中添加700μLRW冲洗液,使其在室温下静置2分钟,在4°C,12,000 rpm下离心30秒钟,除去残留的液体,重复操作步骤并放置将吸附柱放入2 mL收集管中,温度为4°C,以000 rpm离心2分钟以除去残留的液体,将CR3吸附柱转移到新的15 mL离心管中,加入30不加RNase的ddH2O的μL,在室温下放置2分钟,在4°C下以12000 r / min离心。2分钟后,将RNA冷冻于-80°C。共20μL的反转录系统:模板RNA 10μL,随机1μL,dNTP 1μL,混合物1μL,5×缓冲液第一条溶液4μL,不含RNase 3μL的ddH2O,将所有试剂轻轻混合。过该过程进行反应(25℃持续10分钟,42℃持续45分钟,85℃持续5分钟)。应后,将cDNA冷冻在-20°C。CR反应:使用CMV特异性引物(5'-GATGGAAAAATCTGAATCAACCAG-3'上游引物; 5'-AACTGGGAGCACCCCAGATGTG-3'下游引物)扩增,反应体系为10μL:2μLcDNA,F端引物,R端05μL,2×PCR MasterMix 5μL,ddH2O 2μL。PCR反应步骤:94℃3分钟,桂花树价格94℃30秒,57℃30秒,72℃1分钟,35个循环,72℃10分钟。过15%琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物并照相。室桂花fragrans病毒的调查期为2014年,2015年,即3月中旬至5月下旬(3月12日至5月26日),每10个调查一次天,一年8次。查方法:在日光温室的东侧和西侧分别放置两排西葫芦,以保护它们。光温室从东到西分为五个社区,在每个地块的中间,从每行西葫芦中选出两行西葫芦。南部,中部和北部以及60个建立了两个代表性的西葫芦。究了固定西葫芦植物的上部和中部叶上的葫芦数量,以及固定西葫芦植物的30至40头。
  过PCR方法,用甜瓜痰液检测桂花桂花病毒的毒性水平。试期间为2015年9月上旬至11月中旬。植西葫芦时(2015年9月4日),测试罩被防虫网和总共36个毯子隔离。帐被覆盖。2株西葫芦幼苗。
  葫芦种植后10天,20天,30天和40天,将蚊帐覆盖物去除,并重复处理3次,并分别在5分钟,10 d,20 d重复3次蚊帐覆盖物蚊帐被发现后。30天PCR用于检测原始昆虫网络中西葫芦植物的毒性率。1显示,从2014年3月中旬至2014年5月底的调查结果表明,两年中温室壁球和桂花病毒的种群动态基本相似;即瓜叶的数量和西葫芦的毒性。个工厂的费率逐渐增加。岁的有毒西葫芦植物于4月中旬开始出现(发病率从333%到500%),西葫芦菌株的发生率逐渐增加,在2000年达到最高。5月底,以及2014年和2015年的感染菌株率。3167%和3000%;在2014年和2015年,甜瓜分别于4月初和3月下旬开始出现,但当时瓜类数量很少,平均瓜类数量仅为217,021个头/叶。年中之后,甜瓜数量迅速增加,到5月底达到最高值,平均每片叶子2689和2311头。虑到西葫芦病毒的存在与种群动态之间的关系,当瓜的数量尚未出现或增加时,桂花树价格西葫芦植物没有毒性。着甜瓜数量的增加,西葫芦开始出现。长季节之后,西葫芦菌株的比率也增加,西葫芦植物比率的增加与种群动态的增长密切相关。验室测试结果表明,大棚春季西葫芦植物中的桂花病毒中毒率呈逐渐上升的趋势:从3月下旬至4月初,温室是0.4个月大的。半年,成瘾率略有增加(222%至1389%)。5月中旬到5月底,甜瓜的污染率迅速增加。2014年和2015年5月底,瓜类污染率为3611%。4556%(表1)。2显示了防晒温室西葫芦覆盖了100目蚊帐。帐越长,暴露于蚊帐后西葫芦的发生率越低。过5分钟的采样和检测,在40、30、20和10天的防虫网上未处理南瓜。移开昆虫网10天后检测样品,并且用网40、30和20天处理的西葫芦不受影响。
  昆虫网处理10天的西葫芦的发生率为1667%,但四种处理之间无显着差异:在去除昆虫网后20天进行采样西葫芦已经40天没有出现了,西葫芦的发生率为30天。1667%,明显低于10.20天的蚊帐治疗(西葫芦10000%的发生率);在网取样和检测后30天,网中50天西葫芦的发生率为1667%,明显低于网。疗10、20、30天(西葫芦的发病率8333%〜10000%)。意:在相同的列数据之后,不同的小写字母表示差异在005级别上是显着的,不同的大写字母表示差异在001级别上是显着的;结果表明,夏季温室中的葫芦科数量增加了逐渐地,并且闻到了香味的茎的感染率。蚜虫的密度达到一定水平时,就会出现有毒的西葫芦植物,并且发病率会继续增加。

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  春季温室中,含有毒瓜的西葫芦植物在4月中旬出现,然后中毒率逐渐增加,因此西葫芦菌株的出现率在4月中旬和菌株的比率也增加了,再次表明了西葫芦病毒在温室中。病的发生与中毒瓜密切相关。日光温室中,桂花花叶病毒入侵的有毒瓜类健康地给西葫芦喂食,使西葫芦植物有毒,而其他健康的瓜类则将有毒植物变成有毒瓜类。喂食过程中,还会引起其他健康的西葫芦植物,这种恶性循环将导致西葫芦的中毒率增加。此,阻止外来甜瓜的入侵并杀死日光温室中现有的甜瓜是预防和控制西葫芦病毒病的关键。项研究表明,日光温室中100目小胡瓜的昆虫网可以有效降低西葫芦植物的毒性,后来,有毒甜瓜破坏了西葫芦植物,发病率降低了,这甚至表明了温室的日光覆盖。虫网可以防止有毒的甜瓜的入侵,这是控制日光温室西葫芦病毒病的有效措施之一。项研究阐明了日光温室中西葫芦病毒病的存在和规律,以及长期覆盖中瓜与瓜种群之间的动态关系以及西葫芦的防治效果。语“杀虫网”是关于病毒疾病的科学知识,对于西葫芦病毒疾病是科学有效的。防提供了理论基础。是,要在夏季温室中实现对西葫芦病毒病的全面有效控制,还有许多工作要做,有必要加强西葫芦抗病毒种类的选择以及该疾病之间的相互作用,瓜及其寄主,包括瓜。入研究病毒性疾病的传播机制。
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