[桂花树价格]根结线虫的地衣芽孢杆菌的预防和鉴定
时间：2019/11/21 6:30:26 浏览量：
芽孢杆菌的发酵和培养。花根际土壤中分离到的KN1，以及KN1菌株对桂花根线虫病的防治作用及其对桂花的促进作用。菌株已通过分子生物学鉴定。果表明，在温室盆栽试验中，KN1芽孢杆菌的根坏死率和防治效果分别为48.2％和41.5％，相当于单独使用10％的硫唑磷颗粒可以显着减少根结点。
KN1菌根和10％噻唑基颗粒的效果更好，其消灭率和线虫控制率分别为71.5％和57.27％。花与未接种植物的根的质量和干重不同。生物控制分别提高了30.33％和70.89％，根据16S rDNA的系统发育分析，菌株KN1属于苏云金芽孢杆菌，与苏云金芽孢杆菌血清型的Konkukian序列相似。99.5％。态特征已被鉴定为苏云金芽孢杆菌。株KN1的鉴定和温室控制对桂花的调控为研究其生物防治机理及其应用提供了依据。着蔬菜工业的发展，农作物的病虫害变得越来越严重，例如根腐病和线虫，其中桂花线虫是最常见的病害之一。线虫引起的桂花病是由根结线虫感染引起的，主要侵害侧根和纤维根。病植物的最初症状并不明显。病情严重时，植物明显矮化，而瓜又小又小。地部分似乎逐渐萎黄或变黄，最终植物死亡。
前，在生产中控制根结线虫主要依赖于化学试剂和抗病品种的使用。长期作物生产中已采取了一系列措施来控制根结线虫，包括化学和生物杀手，但由于线虫的致病性和耐药性，其效果并不令人满意。的变化很大[1-2]尽管化学杀线剂在大多数情况下是有效的，但它们受到环境污染和人类健康问题的限制。切需要开发一种可以替代化学杀手的生物杀手。前，在许多生物防治措施中，线虫真菌通常用于控制植物线虫病，但商业生物防治剂很少，某些菌株对人体健康有影响。此，需要有效预防和控制线虫坏死病，以找到有效的天然生物制剂来代替有毒化学农药。
孢杆菌属菌株发酵后进行发酵试验。健康的桂花中过筛，并用令人愉悦的桂花作为试验培养物，并在盆栽中进行了生物测定试验以控制桂花根结线虫病。室[3]用于安全有效的预防和发展。花线虫病的生物制剂及其合理应用具有一定的推动作用。KN1菌株保藏在国家重点实验室，用于高效开发和充分利用养分资源，并在新疆临tong市桂花的根际土壤中过滤。东。白ept牛肉奶油：牛肉提取物5.0克，蛋白1 10.0克，氯化钠5.0克，琼脂18.0克，蒸馏水1000毫升，pH 7.0至7.2，灭菌100，000 Pa持续30分钟。子培养基：胰蛋白酶8克，桂花树价格酵母提取物5克，葡萄糖10克，氯化钠5.0克，pH 7.0，倒入300毫升锥形瓶中，每瓶50毫升，在100，000 Pa下灭菌15分钟[4]。酵培养基菌株：玉米淀粉2 g，豆粕粉2.67 g，酵母粉0.55 g，K2HPO4 0.03 g，MgSO4·7H2O 0.02 g，CaCO3 0.04 g， 0.02 g ZnSO4、100 mL蒸馏水，pH 7.2、500在mL烧瓶中，将100，000 Pa灭菌30分钟[4]。
冰箱中取出试管的倾斜表面，并在牛肉糊的平均蛋白p板上划线，将其置于37°C的生化培养箱中并颠倒培养，然后通过连续通过两次。活化的KN1菌落接种到种子培养基中，根据接种量在37°C下以180 rpm摇动18 h，然后接种到发酵培养基中。％，每个小瓶已经接种了发酵培养基。10 ml，以200 rpm的转速搅拌32 h，得到发酵液KN1，将发酵液离心以获得上清液和细菌沉淀，并用无菌水配制细菌沉淀包含100亿CFU / mL的KN1细菌剂。间和位置测试是在金正大生态工程集团有限公司的智能玻璃温室中进行的。2016年9月至2016年12月。试期间的平均温度为28°C，湿度约为70％。试材料为北京301桂花品种，种子由山东省潍坊市蔬菜研究所提供。验剂由日本石原工业株式会社生产的10％噻唑基组成，试验基础肥料为N，P2O5和K2O。15％硝化复合肥；被测土壤是黑色沙江土壤，有机物含量为129 g / kg。先在幼苗上进行实验设计，然后在25天后，选择具有相同幼苗生长的桂花幼苗进行移植，即每盆2株植物。病态土壤从温室中彻底混合，每盆5 kg病态土壤，并在特定时间将硝基复合肥料作为基础肥料施用于土壤，施肥量为0.33克/罐。白对照组（CK），未接种病土；处理1（T1），生根KN1细菌（100亿CFU / mL），处理2（T2），药物处理，1 g 10％噻唑处理3（T3）和KN1细菌在处理2的基础上生根，每组固定4次重复，并及时定量浇水，并且管理措施是一致的。定了KN1菌株对控制桂花根结线虫的影响：在盆栽60天后，将根周围的土壤去除，混合，取100 g作为用Beman漏斗法分离土壤和土壤线虫，以研究土壤中的第二阶段线虫。对于空白对照，计算数量，线虫的下降速率。壤中线虫数量的确定是基于Castillo等人的方法。
定KN1菌株对桂花植物的促进作用在收获时测定植物根的新鲜品质和干燥质量[9-10]。据分析测试数据由Excel处理，SPSS 16.0软件用于数据统计和差异显着性分析。KN1株的16S rDNA的PCR扩增参考谢永利等人的方法。[11]。KN1激活的菌株插入种子培养基中，将种子培养基以70 mL / 300 mL孵育，在37°C，200 rpm下培养24 h，细胞离心收集水，多余的水用无菌滤纸吸收。用细菌基因组DNA提取试剂盒从Ezup专栏[Bioscience Engineering（Shanghai）Co.，Ltd。提取KN1的基因组，扩增引物为16S rDNA。用引物为：27F，5'-AGTTTGATCMTGGCTCAG-3'，1492R，5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3'，引物由生物工程工程（上海）有限公司合成。PCR反应系统：10 x 2.5μL缓冲液，1.0μLdNTP，27μL0.5μL引物，14μR0.5μL，0.2μLTaq酶，0.5μLG1基因组，25μl蒸馏水微升。PCR反应的条件：在95℃下预变性3分钟，在95℃下变性35秒，在55℃下退火45秒，在72℃下延伸90分钟，在72℃下延伸90分钟。10分钟，在4°C终止。
CR产物由Bioengineering Biotechnology（Shanghai）Co.，Ltd.测序，并将16S rDNA序列提交给GenBank，与GenBank中的16S rDNA序列进行比较。据库中显示相似度很高的相似菌株。栽试验结果表明，治疗组对线虫的防治有一定效果，其中线虫的减少率和噻唑基与根系杀菌剂的T3施用防治效果相同。别为71.5％和57.27％。蓿根处理的线虫下降率和防治效果分别为48.2％和41.5％，土壤处理10％后的分别为52.68％和42.15％。唑磷颗粒。KN1细菌和10％的硫唑磷颗粒的防治效果大于40％。二阶段的线虫数量和疾病指数均明显低于对照组。10％的硫唑磷颗粒相关的生防细菌KN1的根使用了线虫损失。标率达71.5％，防治效果达57.27％，具有良好的生物防治潜力。对照相比，KN1根细菌，10％的硫唑磷颗粒的土壤处理和10％的硫唑磷颗粒的土壤处理具有增加植物新鲜度的作用。花，与对照组明显不同。中，桂花植物KN1细菌根系的处理比对照增加30.33％，桂花植物处理的硫唑磷颗粒的10％增加30.12％与对照相比，用10％的硫唑磷颗粒处理的根用于处理桂花土壤。量影响最大，每株鲜重达95.2 g，噻唑基颗粒处理和KN1根处理比对照处理高33.03％，土壤处理略高于10％，但处理组之间的差异不显着。KN1生防菌，KN1苜蓿根，10％硫唑磷颗粒的土壤处理和10％硫唑磷颗粒的土壤处理的干重分别增加了67.34％和66.95％。70.89％，其中用10％噻唑基颗粒处理的根的干重达到4.45 g，生物防腐剂KN1的根处理为4.36 g，但组之间的差异治疗意义不大。图1中可以看出，KN1生物防治细菌对改善桂花植物的新鲜质量和促进根系发育具有显著作用。KN1生物防治菌株的16S rDNA基因的序列扩增到1511 bp的长度，并使用BLAST程序将其与NCBI数据库的序列比对，然后将系统发育树是使用MEGA软件构建的（图2）。Konkukian具有最高的同源性，匹配度可以达到99.5％，与其他芽孢杆菌的遗传距离相对较远，这是通过对KN1为苏云金芽孢杆菌的菌株进行形态学观察确定的。于其安全性，高效性和无污染特性，生物防治正受到越来越多的关注，这使其成为未来防治线虫战略的主要方向之一。瘿。孢杆菌是一种自然界中广泛存在的细菌，具有多种物种，遗传类型以及对各种植物致病性真菌，细菌和线虫的拮抗活性。的营养需求相对简单，易于生存和定殖。制的生物防治剂具有处理简单，使用方便，耐贮藏的优点，是最理想的生物防治菌。室盆栽试验结果表明，KN1生物防治细菌对桂花线虫有明显的防治作用，线虫防治效果大于40％，而且在桂花植物和根上有明显的生长。KN1生防菌对桂花线虫的根系控制作用比单独使用10％噻唑基颗粒的根系控制作用稍低，这对线虫是最好的，而且线虫的枯死率为71.5％。达到57.27％，具有良好的生物防治潜力。个处理组的根的鲜重和干重均比对照高，新鲜产品的质量从21.78〜23.88 g，从30.12％提高到33.03％。％。异达到显着水平，根的干重从1.75〜1.85 g增加。物防治细菌KN1根苜蓿，10％的硫唑磷颗粒在土壤中的干重和10％的硫唑磷颗粒对土壤根的处理增加了67.34％，66.95％和70 ，分别为89％。验结果表明，菌株KN1对线虫有很强的控制作用，而桂花对生长具有促进作用。过测量和分析该菌株的16S rDNA序列，将其鉴定为苏云金芽孢杆菌。云金芽孢杆菌由于其高特异性，对人和动物的安全性，良好的防治效果，不存在生物降解和降解作用而在害虫防治中发挥着越来越重要的作用。十世纪以来使用的原材料的使用简单[12]。从当时的工业生产完成以来，它已成为世界上使用最广泛，商业上最成功的微生物农药，每年以20％的速度增长[13-14]。管苏云金芽孢杆菌的破坏机理尚不十分清楚，但新的杀线虫剂Bt杀线虫剂及其结晶蛋白的发现使人们得以了解结晶蛋白的结构和机理，并寻求其制备用途。
Bt。大的进步。云金芽孢杆菌KN1在控制根线虫功能，促进桂花生长方面具有良好的功能，在生物防治方面具有良好的应用前景。
KN1的发酵工艺和配方尚待优化，这将为KN1菌株的工业化生产和野外线虫病的大规模防治奠定基础。
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桂花树价格 http://m.guihua99.net/m/
KN1菌根和10％噻唑基颗粒的效果更好，其消灭率和线虫控制率分别为71.5％和57.27％。花与未接种植物的根的质量和干重不同。生物控制分别提高了30.33％和70.89％，根据16S rDNA的系统发育分析，菌株KN1属于苏云金芽孢杆菌，与苏云金芽孢杆菌血清型的Konkukian序列相似。99.5％。态特征已被鉴定为苏云金芽孢杆菌。株KN1的鉴定和温室控制对桂花的调控为研究其生物防治机理及其应用提供了依据。着蔬菜工业的发展，农作物的病虫害变得越来越严重，例如根腐病和线虫，其中桂花线虫是最常见的病害之一。线虫引起的桂花病是由根结线虫感染引起的，主要侵害侧根和纤维根。病植物的最初症状并不明显。病情严重时，植物明显矮化，而瓜又小又小。地部分似乎逐渐萎黄或变黄，最终植物死亡。
前，在生产中控制根结线虫主要依赖于化学试剂和抗病品种的使用。长期作物生产中已采取了一系列措施来控制根结线虫，包括化学和生物杀手，但由于线虫的致病性和耐药性，其效果并不令人满意。的变化很大[1-2]尽管化学杀线剂在大多数情况下是有效的，但它们受到环境污染和人类健康问题的限制。切需要开发一种可以替代化学杀手的生物杀手。前，在许多生物防治措施中，线虫真菌通常用于控制植物线虫病，但商业生物防治剂很少，某些菌株对人体健康有影响。此，需要有效预防和控制线虫坏死病，以找到有效的天然生物制剂来代替有毒化学农药。
孢杆菌属菌株发酵后进行发酵试验。健康的桂花中过筛，并用令人愉悦的桂花作为试验培养物，并在盆栽中进行了生物测定试验以控制桂花根结线虫病。室[3]用于安全有效的预防和发展。花线虫病的生物制剂及其合理应用具有一定的推动作用。KN1菌株保藏在国家重点实验室，用于高效开发和充分利用养分资源，并在新疆临tong市桂花的根际土壤中过滤。东。白ept牛肉奶油：牛肉提取物5.0克，蛋白1 10.0克，氯化钠5.0克，琼脂18.0克，蒸馏水1000毫升，pH 7.0至7.2，灭菌100，000 Pa持续30分钟。子培养基：胰蛋白酶8克，桂花树价格酵母提取物5克，葡萄糖10克，氯化钠5.0克，pH 7.0，倒入300毫升锥形瓶中，每瓶50毫升，在100，000 Pa下灭菌15分钟[4]。酵培养基菌株：玉米淀粉2 g，豆粕粉2.67 g，酵母粉0.55 g，K2HPO4 0.03 g，MgSO4·7H2O 0.02 g，CaCO3 0.04 g， 0.02 g ZnSO4、100 mL蒸馏水，pH 7.2、500在mL烧瓶中，将100，000 Pa灭菌30分钟[4]。
冰箱中取出试管的倾斜表面，并在牛肉糊的平均蛋白p板上划线，将其置于37°C的生化培养箱中并颠倒培养，然后通过连续通过两次。活化的KN1菌落接种到种子培养基中，根据接种量在37°C下以180 rpm摇动18 h，然后接种到发酵培养基中。％，每个小瓶已经接种了发酵培养基。10 ml，以200 rpm的转速搅拌32 h，得到发酵液KN1，将发酵液离心以获得上清液和细菌沉淀，并用无菌水配制细菌沉淀包含100亿CFU / mL的KN1细菌剂。间和位置测试是在金正大生态工程集团有限公司的智能玻璃温室中进行的。2016年9月至2016年12月。试期间的平均温度为28°C，湿度约为70％。试材料为北京301桂花品种，种子由山东省潍坊市蔬菜研究所提供。验剂由日本石原工业株式会社生产的10％噻唑基组成，试验基础肥料为N，P2O5和K2O。15％硝化复合肥；被测土壤是黑色沙江土壤，有机物含量为129 g / kg。先在幼苗上进行实验设计，然后在25天后，选择具有相同幼苗生长的桂花幼苗进行移植，即每盆2株植物。病态土壤从温室中彻底混合，每盆5 kg病态土壤，并在特定时间将硝基复合肥料作为基础肥料施用于土壤，施肥量为0.33克/罐。白对照组（CK），未接种病土；处理1（T1），生根KN1细菌（100亿CFU / mL），处理2（T2），药物处理，1 g 10％噻唑处理3（T3）和KN1细菌在处理2的基础上生根，每组固定4次重复，并及时定量浇水，并且管理措施是一致的。定了KN1菌株对控制桂花根结线虫的影响：在盆栽60天后，将根周围的土壤去除，混合，取100 g作为用Beman漏斗法分离土壤和土壤线虫，以研究土壤中的第二阶段线虫。对于空白对照，计算数量，线虫的下降速率。壤中线虫数量的确定是基于Castillo等人的方法。
定KN1菌株对桂花植物的促进作用在收获时测定植物根的新鲜品质和干燥质量[9-10]。据分析测试数据由Excel处理，SPSS 16.0软件用于数据统计和差异显着性分析。KN1株的16S rDNA的PCR扩增参考谢永利等人的方法。[11]。KN1激活的菌株插入种子培养基中，将种子培养基以70 mL / 300 mL孵育，在37°C，200 rpm下培养24 h，细胞离心收集水，多余的水用无菌滤纸吸收。用细菌基因组DNA提取试剂盒从Ezup专栏[Bioscience Engineering（Shanghai）Co.，Ltd。提取KN1的基因组，扩增引物为16S rDNA。用引物为：27F，5'-AGTTTGATCMTGGCTCAG-3'，1492R，5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3'，引物由生物工程工程（上海）有限公司合成。PCR反应系统：10 x 2.5μL缓冲液，1.0μLdNTP，27μL0.5μL引物，14μR0.5μL，0.2μLTaq酶，0.5μLG1基因组，25μl蒸馏水微升。PCR反应的条件：在95℃下预变性3分钟，在95℃下变性35秒，在55℃下退火45秒，在72℃下延伸90分钟，在72℃下延伸90分钟。10分钟，在4°C终止。
CR产物由Bioengineering Biotechnology（Shanghai）Co.，Ltd.测序，并将16S rDNA序列提交给GenBank，与GenBank中的16S rDNA序列进行比较。据库中显示相似度很高的相似菌株。栽试验结果表明，治疗组对线虫的防治有一定效果，其中线虫的减少率和噻唑基与根系杀菌剂的T3施用防治效果相同。别为71.5％和57.27％。蓿根处理的线虫下降率和防治效果分别为48.2％和41.5％，土壤处理10％后的分别为52.68％和42.15％。唑磷颗粒。KN1细菌和10％的硫唑磷颗粒的防治效果大于40％。二阶段的线虫数量和疾病指数均明显低于对照组。10％的硫唑磷颗粒相关的生防细菌KN1的根使用了线虫损失。标率达71.5％，防治效果达57.27％，具有良好的生物防治潜力。对照相比，KN1根细菌，10％的硫唑磷颗粒的土壤处理和10％的硫唑磷颗粒的土壤处理具有增加植物新鲜度的作用。花，与对照组明显不同。中，桂花植物KN1细菌根系的处理比对照增加30.33％，桂花植物处理的硫唑磷颗粒的10％增加30.12％与对照相比，用10％的硫唑磷颗粒处理的根用于处理桂花土壤。量影响最大，每株鲜重达95.2 g，噻唑基颗粒处理和KN1根处理比对照处理高33.03％，土壤处理略高于10％，但处理组之间的差异不显着。KN1生防菌，KN1苜蓿根，10％硫唑磷颗粒的土壤处理和10％硫唑磷颗粒的土壤处理的干重分别增加了67.34％和66.95％。70.89％，其中用10％噻唑基颗粒处理的根的干重达到4.45 g，生物防腐剂KN1的根处理为4.36 g，但组之间的差异治疗意义不大。图1中可以看出，KN1生物防治细菌对改善桂花植物的新鲜质量和促进根系发育具有显著作用。KN1生物防治菌株的16S rDNA基因的序列扩增到1511 bp的长度，并使用BLAST程序将其与NCBI数据库的序列比对，然后将系统发育树是使用MEGA软件构建的（图2）。Konkukian具有最高的同源性，匹配度可以达到99.5％，与其他芽孢杆菌的遗传距离相对较远，这是通过对KN1为苏云金芽孢杆菌的菌株进行形态学观察确定的。于其安全性，高效性和无污染特性，生物防治正受到越来越多的关注，这使其成为未来防治线虫战略的主要方向之一。瘿。孢杆菌是一种自然界中广泛存在的细菌，具有多种物种，遗传类型以及对各种植物致病性真菌，细菌和线虫的拮抗活性。的营养需求相对简单，易于生存和定殖。制的生物防治剂具有处理简单，使用方便，耐贮藏的优点，是最理想的生物防治菌。室盆栽试验结果表明，KN1生物防治细菌对桂花线虫有明显的防治作用，线虫防治效果大于40％，而且在桂花植物和根上有明显的生长。KN1生防菌对桂花线虫的根系控制作用比单独使用10％噻唑基颗粒的根系控制作用稍低，这对线虫是最好的，而且线虫的枯死率为71.5％。达到57.27％，具有良好的生物防治潜力。个处理组的根的鲜重和干重均比对照高，新鲜产品的质量从21.78〜23.88 g，从30.12％提高到33.03％。％。异达到显着水平，根的干重从1.75〜1.85 g增加。物防治细菌KN1根苜蓿，10％的硫唑磷颗粒在土壤中的干重和10％的硫唑磷颗粒对土壤根的处理增加了67.34％，66.95％和70 ，分别为89％。验结果表明，菌株KN1对线虫有很强的控制作用，而桂花对生长具有促进作用。过测量和分析该菌株的16S rDNA序列，将其鉴定为苏云金芽孢杆菌。云金芽孢杆菌由于其高特异性，对人和动物的安全性，良好的防治效果，不存在生物降解和降解作用而在害虫防治中发挥着越来越重要的作用。十世纪以来使用的原材料的使用简单[12]。从当时的工业生产完成以来，它已成为世界上使用最广泛，商业上最成功的微生物农药，每年以20％的速度增长[13-14]。管苏云金芽孢杆菌的破坏机理尚不十分清楚，但新的杀线虫剂Bt杀线虫剂及其结晶蛋白的发现使人们得以了解结晶蛋白的结构和机理，并寻求其制备用途。
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