[桂花树价格]桂花病原菌的毒性条件和毒性活性检测

　　为了弄清光滑延胡索属的最佳毒素产生培养基和最佳生长时间，从O叶的叶片中分离出高致病性菌株HG2。
　　过种子发芽在天津收集的中华草。过四种方法测定粗毒素的生物活性：生长法，枯萎法，叶盘法和悬滴接种法。果表明，改良的Czapek培养基是中华绒螯蟹生产的最佳培养基，培养时间为21〜25天，种子萌发和枯萎较适合。素总活性的测定。花叶斑病是一种由Corynspo-ra cassiicola引起的真菌病，主要感染植物的叶子，茎，花和果实，导致脱叶和严重的果实落落。中国河南，辽宁等地，1993年，据报道桂花的培养地点普遍感染了多孢杆菌。年来，山东，河北，北京，辽宁，吉林，河南，海南等地的大多数桂花品种遭受了严重破坏，造成了巨大的经济损失。民并成为生产桂花的主要疾病。防治桂花叶斑病中，选择抗病品种是最经济有效的措施。
　　此，选择具有优良的完整桂花叶斑病抗性的桂花品种对产业发展具有重要意义。物病原真菌可以分泌毒素，使宿主植物产生特定的病理反应，并在发生植物病害时具有明显的致病作用。年来，人们越来越关注使用植物病原性真菌产生的一系列毒素来快速鉴定抗病宿主品种，检测对疾病具有抗性的突变体等，并且探索病原菌的致病条件已成为一个新的热点。前，已经进行了一些从感染橡胶木的病原真菌中分离和提取活性病原体的研究，并且已经鉴定了活性成分的鉴定。冕属是宿主的选择性毒素。
　　时，研究表明，侵染橡胶和桂花的双孢蘑菇的形态，致病性和系统发育上存在显着差异，但是对感染的研究弓形虫接种桂花的比例较低。本研究中，研究了弓形虫生产的最佳条件和毒素活性的检测，以寻找致病细菌的最佳培养基和时间，并建立一种简单且可比的方法。于检测毒素的活性。子叶斑病毒的发病机理及其在筛选抗病品种和抗病突变体中的应用奠定了基础。2012年9月，在天津市西青区张家窝村采集了桂花叶斑病的典型病理标本。用常规组织分离法对12株C.菌株进行分离。过纯化和分离单个孢子获得纯化的中华。菌株可以感染桂花，并在桂花的真叶上形成圆形或不规则形状的黄色病灶，并散发出令人愉悦的气味。据科赫定律，已经确定了致病性，并且已经获得了致病性菌株HG2作为生产产毒培养基的目标菌株。实验使用以下四种液体培养基：（1）改良的Fries培养基：蔗糖30克，酒石酸铵5克，NH4NO31克，MgSO4 40.5克，NaCl0.5克，CaCl2 20.1克，酵母提取物0.5 g，蒸馏水1 L，pH调节至7.0。（2）PD培养基：每1 L马铃薯200 g，葡萄糖和20 g蒸馏水。3）Czapek改良培养基：蔗糖30 g，桂花树价格L-谷氨酸2.2 g，KCl1g，K2HP040 ，5克，MgSO4.7H2O0.5克，FeSO4.7H2O0.01克，ZnSO4.7H2O0.01克，CuSO4.7H2O0.01克，蒸馏水1升，将pH调节至7.0。（4）理查德氏培养基：将蔗糖50g，KNO 310g，K 2 HPO 45g，MgSO 42.5g，FeCl 30.02g，1L蒸馏水150ml上述液体介质加入到烧瓶中。250毫升和24瓶每种液体培养基。桂花测试菌株转移至PDA培养基中进行活化，在25°C下培养10天，并使用钉钻在菌落边缘打浆细菌饼，使其均匀生长。

　　径4毫米。黑暗条件下，在25℃下以120rpm搅拌进行搅拌培养。养第3、5、7、10、15、21、25和30日的每种培养基，每次取3瓶。过双重灭菌滤纸过滤培养液以除去菌丝体，然后用0.22μm微孔膜抽滤以获得无菌滤液，即黄腐梭菌的粗毒素滤液。放在-4°C的冰箱中使用。桂花种子的活性通过种子发芽法测定了粗毒素滤液对桂花种子的活性。择中农5号桂花品种，将50株桂花种子放入装有双层灭菌滤纸的培养皿中，加入5ml经不同处理得到的粗毒素滤液，加入无菌水作为对照。疗程3个疗程在28℃的培养箱中进行36小时的发芽，对种子发芽进行计数，测量芽的长度并计算发芽率。花叶片萎缩的方法。
　　出20ml烧瓶，并分别加入5ml通过每次处理获得的粗毒素滤液，将收集的相同生长期的桂花叶浸入滤液中，并浸入5ml水中。菌水为空白。次治疗重复3瓶。25°C的培养箱中孵育3天（光周期为12小时）。

　　素的作用导致桂花叶片萎。片干重和湿重的百分比用于确定毒素引起的叶片枯萎程度。青枯性（％）=（处理后干重的干重％-对照干重的干重）/对照干重的干重x100。片盘法。相同的生长期采集的桂花叶在圆盘上用直径1厘米的打孔器摘下，然后每20片圆片重复一次，立即浸入9厘米的培养皿中。径为10毫升的主要孢子粗毒素。（将光盘的背面朝下倒入光盘的背面），浸入10 mL无菌水作为空白对照。种治疗重复3次。25°C的培养箱中孵育3天（光周期为12小时）。素的作用导致桂花叶绿化和泛黄。素的活性通过叶盘的泛黄程度来衡量。

　　种叶法滴下悬浮毒素。集同一生长时期的桂花叶，并放入带有两层浸滤纸的大培养皿中。桂花叶的左侧和右侧接种20 µL的粗毒素滤液，以接种20 µL的无菌水作为空白对照。种处理重复三盘，每盘放置一片桂花叶。25°C的培养箱中孵育3天（光周期为12小时）。素的作用导致在接种时桂花的叶子从绿色变为黄色，通过交叉法测定了交叉法形成的圆形损伤的大小和毒素的活性。过病灶面积和接种点叶黄变的程度来测量。原菌可以在四种培养基中正常生长，其中菌丝在液体PD培养基中生长较快，经过10天的培养，菌丝量较大，培养液滤液明显。如其他培养基，形成菌丝体聚集。菌的大气球。其他三个环境中，菌丝生长缓慢，形成较小的菌丝。同培养基，不同时间收集的定量培养滤液对桂花种子萌发和生长的影响表明，不同环境处理的种子发芽率和芽长均降低。先，然后随着增长时间而增加。改良的Fries培养基和Richard培养基处理15到21天，将PD培养基处理10到15天，将改良的Czapek培养基处理21到25天。

　　
　　所有处理中，在PD培养基中生长的大孢假单胞菌产生的毒素滤液相对抑制了桂花种子的发芽和生长，而在Czapek培养基中生长的球形隐孢子虫培养物滤液则得到了改善。花种子的发芽。果最明显：21d培养物中的毒素浓度最高，抑制作用最高（表1）。较不同培养时期的桂花叶片上的培养基叶片萎强度（表2），结果表明，毒素滤液显着增加了叶片萎wil强度。花的水分胁迫控制下，其萎the强度为10％。右，粗毒素培养滤液的毒素强度可达到约18％。中，每种培养基处理后的叶片萎intensity强度随培养时间的增加先升高后降低，对Fries和Richard改良培养基进行21天处理，对PD培养基进行PD处理。15天，桂花树价格使用改良的Czapek中间膜。疗至少持续25天。所有处理中，由在第25天生长的改良Czapek培养基产生的毒素滤液具有最高的毒素滤液活性，达到18.380％，显着高于d产生的滤液活性。他环境。来自不同培养基和不同培养时间的粗毒素滤液接种到叶盘中，并在培养5天后从PD和改良的Czapek培养基中获得粗毒素滤液。P. megasporum对处理过的桂花叶盘有毒作用，使其褪色。色至黄色，经修饰的Fries培养基和Richard桂花叶毒性培养基处理7天后获得的粗毒素滤液，表明产生的毒素活性低于PD滤液和从Czapek培养基中获得的修饰毒素。
　　15天时从四种培养基中获得的毒素滤液产生了明显的毒性作用（表3）。培养了7天的液体球形螺旋体毒素叶接种到桂花叶中。种后第5天未观察到症状。素滤液对桂花的叶子没有毒性作用。滤液培养10天后，桂花的接种叶显示在第五天观察到接种点为褪绿和黄色，受影响区域小于1。
　　cm2，产生较小的毒性作用。养15-30天后产生的毒素滤液对桂花叶片具有强烈的毒性作用，并且产生了大面积的毒素感染板（表4）。实验的结果表明，球形假单胞菌的毒性能力与其培养基的组成密切相关，并且在改良的Czapek培养基中产生毒素的活性最高，可以使用。为最佳媒介PD培养基中的产毒活性低。是，菌丝体的生长最大，更适合于病原体的营养繁殖。
　　相同的培养条件下，培养时间也对毒素活性有显着影响：将Czapek培养基培养21至25天，产毒活性最大，而长时间温育对毒素的活性具有抑制作用。子发芽法和叶子萎ting法可以定量毒素的活性，而叶盘法和悬浮液滴接种法主要通过观察来测量毒素的活性。状。果获得的毒素浓度有限，则测量种子发芽活性和枯萎的两种方法都更合适。
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