[桂花树价格]绿色花叶和桂花花叶病毒中山西西瓜分离壳蛋白基因序列分析
时间：2019/12/3 6:31:35 浏览量：
利用病毒dsRNA分离技术，序列独立PCR扩增技术（SIA）检测和鉴定山西太谷采集的西瓜病标本）和RTPCR已确认这是绿色花蝇果蝇花叶病毒，绿色黄瓜麦考尔花叶病毒（CGMMV）。了确定CGMMV西瓜分离株（CGMMVSXTG）的分类学地位，本研究进一步克隆了完整的CGMMVSXTG外壳蛋白（CP）基因序列并进行了序列分析。统进化树分析表明，该分离株与亚洲分离株邻近，但是与欧洲分离株的远缘关系表明，该病毒的不同分离株可能与该簇中的区域有一定关系，然后分离株CP基因核苷酸序列和氨基酸序列的同源性。比分析表明，该菌株与中国山东菌株（TANG）具有最高的同源性，分别达到99.8％和99.6％。瓜绿猕猴花叶病毒（CGMMV）是直杆单链RNA病毒，桂花树价格大小为300 nm x 18 nm，属于烟草花叶病毒属[1]。影响葫芦的各种作物，是中国农作物的检疫生物[2]。1935年，英国的Ainsworth [3]首次报道了斑驳的花叶病毒桂花损害了桂花。2004年中国首次从日本进口的南瓜籽中截获CGMMV以来，已经出现了许多进口的CGMMV [4]。
2005年，广西农业科学院在广西农业展览中心从观赏南瓜叶片中分离出CGMMV [5]。2006年，陈鸿运等。[6]检测到辽宁西瓜的CMGMV。2007年，李红霞等。[7]在甘肃南瓜上检测到CGMMV； 2008年，秦碧霞等。[8]从广西南瓜中检测到CGMMV； 2009年，田永磊等[9]在北京甜瓜和山东西瓜中检测到了CGMMV的存在。
花花叶病毒是葫芦的一个严重问题，不仅损害正常的植物生长，而且对农民造成巨大的经济损失。瓜果实感染桂花花叶病毒后，种子周围的果肉会变成紫红色或暗红色的水斑。它成熟时，它变成深褐色并显得空心，显示出类似于丝瓜络的形状，通常被称为“血肉”。严重的情况下，变色的部分会软化并溶解，变得片状，苦味和不可食用，并失去经济价值[10]。瓜山西太谷在三晋市很有名，桂花树价格种植面积已达17300 hm2，使其成为该国增加收入和促进农村发展的最重要产业之一。者在山西太谷的西瓜田中发现了流行病，发病率高达90％。病植物的绿叶呈淡黄色和浅绿色条纹，或减少并弯曲。集具有明显花叶和蕨叶症状的疾病样品，并采用分子分离的方法检测和鉴定该病毒，证实该病毒已被蛋白基因CMGMV感染。
CGMMV信封（CP）已被克隆。序和序列分析为研究CMGMV遗传和突变提供了理论基础。毒样疾病：在山西太谷的一个西瓜田中采集到了类似病害的叶子，具有典型的花叶症状（图1）。要试剂：从Promega购买了莫洛尼鼠白血病病毒（MMLV）逆转录酶，从TaKaRa购买了核糖核酸酶抑制性核酸酶抑制剂，并克隆了载体pUCmT，Taq和聚合DNA和琼脂糖购自Sangon Biotech。物的设计和合成：本实验中使用的269和177引物由实验室拥有的南京农业大学植物保护学院讲师陶晓荣捐赠； （XGCPF / R）。列示于表1。
是由Sangon Biotech合成的。照牛艳冰等的方法。[1112]和Tzanetakis等人。[13]并通过改进它们，提取了dsRNA。用与提取的疾病相关的dsRNA作为模板，使用随机锚引物269作为逆转录引物进行逆转录，以获得第一条cDNA链，然后锚引物177用于PCR扩增。应后，进行琼脂糖凝胶电泳。提取的致病性dsRNA为模板，以M4T为反转录引物，进行反转录得到第一条cDNA链，然后使用XGCPF / R特异性引物获得cDNA的第一条链。
PCR扩增。应后，进行琼脂糖凝胶电泳。琼脂糖凝胶回收试剂盒回收目标片段，并与pUCmT克隆载体连接进行转化，通过PCR和酶切鉴定阳性克隆，送交上海神工公司测序。录GenBank以搜索使用BLAST获得的序列，结合共享数据的NCBI GenBank部分，使用DNAMAN软件比较和分析核苷酸序列和氨基酸序列同源性用报道的分离物序列测定的序列的序列，并使用MEGA 4.1软件构建。统发育树，西葫芦属与绿色腐烂花叶病毒（ZGMMV）相同，是一个外部群体。提取的dsRNA为模板，以269/177为SIA鉴定引物，对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，得到约1000 bp的片段，但未见片段。健康样品中扩增（图2）。过克隆，测序和序列比较，发现该部分序列与NCBI中桂花绿粉丝的分离株相似度在88％至99％之间，其中它类似于分离株JSHZ12（KC852073），KW（AF417242）。TANG（HM008919）和C（FJ654658）具有99％的相似度，因此最初被标识为CGMMV。了阐明引起西瓜病毒的病原体的类型和分类状态，以提取的ssRNA为模板，M4T为逆转录引物，XGCPF / R为PCR引物。特异引物进行PCR检测，对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。测后，目标片段大小为875 bp，但在健康样品中未扩增出任何片段（图3）。分析序列比较之后，发现部分序列与NCBI中的各种CMGMV分离株具有91％至99％的同源性。表明西瓜病毒病是由CGMMV感染引起的，分离株名为CGMMVSXTG。
GenBank从不同区域选择了23种CGMMV分离株，并使用DNAMAN软件对这些分离株CP基因的核苷酸和氨基酸序列同源性进行了分析（表2）。果表明，CGMMVSXTG的CP基因的核苷酸序列和氨基酸序列与其他CMGMV株的同源性大于90％，而与ZGMMV代表株的序列同源性高。远小于90％。些分离物CP基因核苷酸序列的系统树构建结果如图4所示。该实验中，首次通过分子生物学鉴定了被感染西瓜中的病毒病原体。列无关PCR（SIA）扩增技术。列分析表明，感染的症状是由CGMMV感染引起的。SIA技术涉及在dsRNA上添加随机引物，该引物包含20个连接到5'末端的核苷酸，并在3'末端包含随机的简并核苷酸序列，并通过逆转录酶的作用进行延伸。
PCR延伸过程中，一部分固定序列作为引物添加，扩增后的产物经过电泳分析，克隆和测序[14]。SIA的特点是测试时间短，步骤简单，病毒拷贝数高并且不需要特定试剂。了更精确地确定CGMMVSXTG的分类学地位和进化关系，基于SIA检测，根据受试病毒的保守序列设计了引物，并同时扩增了病毒的完整序列。用RTPCR技术。统发育分析。系统发育树中可以清楚地看出，CMGMV分离株可大致分为两组，第一组属于亚洲国家，第二组属于欧洲国家。CGMMVSXTG与亚洲国家（如韩国，日本）的分离株具有相似的同源性，与中国内陆地区的分离株非常相似，与西班牙和俄罗斯的分离株相距甚远。化差异。以解释，不同CMGMV分离株的基因组变异表现出一定的区域相关性。过进一步的序列比对，发现来自中国山东的TANG（HM008919）的核苷酸序列和氨基酸序列具有最高的同源性（99.8％）。99.6％）。自韩国（AF417243）和日本（D12505）的分离物具有99.2％的核苷酸序列同源性和99.0％的氨基酸序列同源性。表明日本和韩国报道的CGMMVSXTG和CGMMV是流行病的共同传染源，也证实了中国的CGMMV可以从国外引进[15]。实验研究方法可为后期病毒病原菌的分子鉴定提供参考，同时为有效预防和控制西瓜中CGMMV的流行提供重要依据。
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桂花树价格 http://m.guihua99.net/m/
2005年，广西农业科学院在广西农业展览中心从观赏南瓜叶片中分离出CGMMV [5]。2006年，陈鸿运等。[6]检测到辽宁西瓜的CMGMV。2007年，李红霞等。[7]在甘肃南瓜上检测到CGMMV； 2008年，秦碧霞等。[8]从广西南瓜中检测到CGMMV； 2009年，田永磊等[9]在北京甜瓜和山东西瓜中检测到了CGMMV的存在。
花花叶病毒是葫芦的一个严重问题，不仅损害正常的植物生长，而且对农民造成巨大的经济损失。瓜果实感染桂花花叶病毒后，种子周围的果肉会变成紫红色或暗红色的水斑。它成熟时，它变成深褐色并显得空心，显示出类似于丝瓜络的形状，通常被称为“血肉”。严重的情况下，变色的部分会软化并溶解，变得片状，苦味和不可食用，并失去经济价值[10]。瓜山西太谷在三晋市很有名，桂花树价格种植面积已达17300 hm2，使其成为该国增加收入和促进农村发展的最重要产业之一。者在山西太谷的西瓜田中发现了流行病，发病率高达90％。病植物的绿叶呈淡黄色和浅绿色条纹，或减少并弯曲。集具有明显花叶和蕨叶症状的疾病样品，并采用分子分离的方法检测和鉴定该病毒，证实该病毒已被蛋白基因CMGMV感染。
CGMMV信封（CP）已被克隆。序和序列分析为研究CMGMV遗传和突变提供了理论基础。毒样疾病：在山西太谷的一个西瓜田中采集到了类似病害的叶子，具有典型的花叶症状（图1）。要试剂：从Promega购买了莫洛尼鼠白血病病毒（MMLV）逆转录酶，从TaKaRa购买了核糖核酸酶抑制性核酸酶抑制剂，并克隆了载体pUCmT，Taq和聚合DNA和琼脂糖购自Sangon Biotech。物的设计和合成：本实验中使用的269和177引物由实验室拥有的南京农业大学植物保护学院讲师陶晓荣捐赠； （XGCPF / R）。列示于表1。
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GenBank从不同区域选择了23种CGMMV分离株，并使用DNAMAN软件对这些分离株CP基因的核苷酸和氨基酸序列同源性进行了分析（表2）。果表明，CGMMVSXTG的CP基因的核苷酸序列和氨基酸序列与其他CMGMV株的同源性大于90％，而与ZGMMV代表株的序列同源性高。远小于90％。些分离物CP基因核苷酸序列的系统树构建结果如图4所示。该实验中，首次通过分子生物学鉴定了被感染西瓜中的病毒病原体。列无关PCR（SIA）扩增技术。列分析表明，感染的症状是由CGMMV感染引起的。SIA技术涉及在dsRNA上添加随机引物，该引物包含20个连接到5'末端的核苷酸，并在3'末端包含随机的简并核苷酸序列，并通过逆转录酶的作用进行延伸。
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