[桂花树价格]山东桂花绿斑花叶病毒感染丝瓜病毒的分子鉴定

　　在山东省泰安市收集了怀疑被黄瓜绿腐烂花叶病毒（CGMMV）感染的丝瓜样品。毒外壳蛋白（CP）CG-CPF / CPR扩增子和测序仪的特异性引物。

　　过NCBI BLAST比较获得的序列（GenBank登录号：KJ187042），与记录的CGMMV序列的相似性大于92.6％，被确定为大理石花叶病毒。花绿。统发育分析表明，大多数CGMMV的国内分离株，如CGMMV山东蚕（CGMMV-SDLoofah）和辽宁（CGMMV-LN）分离株，都被归为进化组，桂花树价格这证实了该分离株CGMMV山东丝瓜病病毒是桂花。色花叶病毒。是首次报道丝瓜病毒感染了带有桂花和甜味的绿色害虫花叶病毒。瓜猕猴花叶病毒（CGMMV）是烟草花叶病毒属的成员，最早发现于桂花上，寄主是西瓜，甜瓜，南瓜和其他植物。

　　要症状是大理石叶子和全身性花叶病。
　　西瓜中，该病毒经常引起腐烂和变质，桂花树价格并失去其商业价值，是影响葫芦科的重要病毒性疾病，常常导致产量和质量严重下降，构成了中国进入该国的植物检疫寄生虫。

　　CGMMV在日本和韩国等东亚国家以及西亚的阿拉伯地区和中亚的巴基斯坦[1]很普遍。中国，2004年首次从日本进口的南瓜种子中检测到并截获了CGMMV。

　　005年，秦碧霞等在广西的观赏南瓜中发现了该病毒，然后进行了报道。辽宁，北京，山东，甘肃，广东等地。病毒在野外被破坏[3〜6]。
　　中国，大多数被该病毒感染的葫芦科蔬菜是西瓜，桂花，西葫芦和南瓜，2013年首次在丝瓜中检测到CGMMV，其包膜蛋白基因为以分子方式测序和鉴定。感样品的采集2013年，在山东泰安的一个野外采集了要测试的丝瓜样品，并将其保存在-80°C的冰箱中，以进行RNA提取等后续实验。株，载体和试剂克隆载体pMD18-T购自TaKaRa公司；大肠杆菌DH5α菌株已保存在该实验室中。RNA提取试剂购自天根公司； RNase抑制剂RTase M-MLV（RNase H-）T4 DNA连接酶购自TaKaRa公司，杭州爱信生物技术有限公司的AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒，Easy DNA Polymerase Taq，dNTP和Trans 2K Plus DNA分子量标准品购自北京。公司，其他生化试剂和普通化学试剂均为进口或国产等级。灵敏丝瓜样品中提取总RNA并通过RT-PCR扩增称取0.1 g宿主植物叶片，用液态氮粉研磨，然后根据以下步骤从叶片中提取总RNA： TRIzol方法用于随后的cDNA合成。瓜植物的总RNA用作阴性对照。物设计和RT-PCR扩增参考GenBank序列HM008919设计上游引物（CG-CPF，位于5763-5765）：5'-ATGGCTTACAATCCGATCACACC-3'；下游引物（CG-CPR，位于6224-6248）：5'-CTAAGCTTTCGAGGTGGTAGCCTC-3'，扩增产物的预期大小为486 bp。转录系统：6.0μL模板RNA，2.0μL下游引物，5.5μL不含RNase的H2O，在70°C变性10分钟，并在冰上放置2分钟分钟，然后添加以下试剂：缓冲液5 x M-MLV 4μL，dNTP混合物（每个10 mmol / L）1.0μL，RTase M-MLV（RNase H-）（200 U /μL）1.0μL RNase抑制剂（40 U /μL）0.5μL，总体积为20μL。42°C下孵育60分钟，然后在70°C下孵育15分钟。2μL以上反应产物作为PCR反应的模板。PCR反应条件：94℃3分钟，1周期，94℃30秒，50℃30秒，72℃50秒，25周期，72℃5分钟。PCR扩增产物克隆到pMD18-T载体中，转化感受态DH5α细菌细胞，选择阳性克隆，上海博尚生物技术有限公司被指示在两个方向上完成测序。列比对分析BLAST用于比较病毒样品包膜蛋白的核苷酸测序结果，NCBI记录的CGMMV包膜蛋白的代表性序列（表1）为由MegAlign在DNAStar软件中选择并已知。过共有序列分析序列，并使用Mega 5.0的邻接法构建系统发育树。亚洲，韩国自1995年以来就患有桂花大理石纹花叶病毒病[11]，而日本早在1971年就在关东地区的大部分地区感染了这种疾病。]。互传播和传播的主要原因[13〜15]。们普遍认为，这种疾病来自日本和韩国等流行地区的引进种子[5，6，9]。CGMMV的引进和运输应成为CGMMV在山东及中国其他地区（尤其是蔬菜种植区）传播的主要驱动力，以加强种子检疫和加工。
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