[桂花树价格]桂花绿色花叶病毒磁性免疫层析试纸的制备
时间：2019/12/6 6:33:02 浏览量：
已经开发了一种被磁性纳米颗粒标记并针对桂花绿斑花叶病毒的多克隆兔抗体，以及一种用于快速简便地检测磁性免疫色谱试纸的方法。方法检测纯化病毒的灵敏度为0.1μg/ mL，葫芦病汁的检测可以稀释10，000倍（重量/体积）。应条和桂花绿害虫花叶病毒有特异性反应，与烟草花叶病毒，番茄花叶病毒，花叶病毒没有交叉反应。斑点的胡椒和兰花环斑病毒是同一种。纸可用于现场检测和诊断疾病。键词黄瓜绿骨髓花叶病毒，磁免疫色谱法，免疫条黄瓜绿骨髓花叶病毒（CGMMV）是烟草花叶病毒属的一种，桂花树价格它是一种用于农业的国家检疫生物。中国的进入。疫性害虫。CGMMV主要影响葫芦科作物，造成大理石斑纹的叶子，全身性花叶病和其他症状，导致产量和质量下降，这对生产非常有害[1]。病毒分布在英国，以色列，西班牙，希腊，沙特阿拉伯，印度，巴基斯坦，韩国和日本，以及其他国家和地区[2]。
据中国农业部发布的《 2012年中国植物检疫分布管理区域清单》，辽宁，上海，江苏，浙江，安徽，湖北，湖南，广东，广西[3]，海南等十个省（区，市）的59个县（市，区）都有CGMMV分布。现场对CGMMV进行早期诊断和检测，并采取有效的检疫措施可以预防疾病的传播[45]。前，CMGMV快速检测方法主要是金免疫色谱分析（GICA），可在15分钟内提供测试结果。体金免疫色谱法使用胶体金标记特定的检测抗体，胶体金染色用于肉眼识别检测结果，但植物叶绿素有时会干扰在确定黄金的结果。性纳米粒子是一种新型的纳米材料，其核心由超顺磁性Fe3O4或铁磁性γ-Fe2O3组成。顺磁性纳米材料可以在外部磁场的作用下迅速聚集，并且在没有磁场的情况下可以均匀分散，表面上功能化的磁性纳米材料可以用于纯化蛋白质等生物大分子。DNA和RNA以及细胞病原微生物的分离和检测[6]，例如，针对人类免疫缺陷病毒的抗体的检测，表面抗原的定量检测。类乙型肝炎和农药的测定[79]。种磁性纳米材料是棕色的，具有可用于检测的磁性信号。
3卷，魏美生等。桂花绿大理石纹花叶病毒的磁性免疫色谱测试条的研制，带有令人愉悦的香水2014磁性免疫色谱。花大理石花纹花叶病毒是辽宁盖州的一种分离株。
病毒已乘以三倍，然后接种在葫芦上（Lagenaria siceraria）。关病毒的纯化，请参见参考文献[10]。花绿花叶病毒兔多克隆兔抗体在家生产，并用1 mL HiTrap Protein G（GE公司）色谱柱纯化。兔抗体购自军事医学科学院微生物与流行病学研究所。性纳米材料是Chemicell MAG-UC / A流体（100 nm）。谱膜是来自Millipore的HiFlow Plus HFB 13502（目录号HF13502S25）。力分离器是Bioreba的产品。25μg纯化的CGMMV兔多克隆抗体，并将其添加到400μL蒸馏水中，添加100 mg流体纳米颗粒MAG-UC / A，并在室温下摇动孵育1小时。性纳米粒子。放在冰箱4中以备将来使用。CGMMV兔多克隆抗体和山羊抗兔抗体用固相溶液（0.02 mol / L磷酸盐缓冲溶液，pH 8.0）稀释，浓度为2 mg / mL和8 mg / mL。BioDot XYZ 3050三维喷雾点平台上，使用BioJet Quanti 3000微定量非接触式打印头，将上述两种抗体均匀喷在硝酸纤维素膜上，形成两条平行的中等厚度的线，即检测线T和质量控制线C。固相抗体硝化纤维膜置于封闭溶液（1％脱脂奶粉）中在37℃的水浴中温育1小时，然后在室温下在0.02 mol / L磷酸盐缓冲液pH 7.0中洗涤两次。
干，保存在4 8待用。25mm×300mm固相硝化纤维素膜粘附到80mm×300mm双面粘合塑料板的25mm端部的内侧。一条20 mm x 300 mm的玻璃纤维素纸条粘贴到双面胶塑料板的25 mm末端，并用抗体的固相NC膜覆盖2 mm，然后粘上一层MAX标记的胶带。双面粘合板的30mm端，用2mm覆盖25mm×300mm宽的纸巾和涂有抗体的固相硝化纤维素纸，并粘合一层胶带。
C和T线均为棕色，结果为正。毒（马赛克番茄病毒，ToMV），甜椒髓病毒（PMMoV），齿齿环斑斑病毒（ORSV），仅C线呈褐色，不显示T线不是棕色，结果为阴性。康测试条和缓冲液对照试纸的结果在C行仅为棕色，而在T行则不是棕色，结果为阴性。果表明，磁性免疫色谱试纸的检测特异性强。过磁性免疫色谱条检测纯化的CGMMV的灵敏度可以达到0.1μg/ mL（见图2），对CGMMV丝瓜叶汁的检测可以稀释10，000倍（W / V）（见图3）。T行健康对照未显影的颜色避免了叶绿素植物的干扰。体金试纸对纯化的CGMMV的检测灵敏度可以高达0.1μg/ mL（见图4），而对CGMMV罐头叶汁的控制可以稀释10，000倍（W / V） ，但健康对照位于受叶绿素干扰的T线上，有时会显示为绿线（见图5）。径小于100 nm的磁性纳米颗粒，桂花树价格由于需要通过更强的磁场将其分离，因此普通磁性分离器难以迅速聚集超顺磁性纳米材料，在本文中，纳米颗粒也很难聚集选择直径为100 nm的磁性负电荷进行标记。体和标记物是通过物理吸附获得的。种磁性纳米材料比用于标记的胶体金和分散体系中的盐等电解质中的20-30 nm粒子[11]大得多。易引起磁性纳米粒子。
集和沉淀会阻止颗粒在色谱膜上行走，并且无法到达C和T线，从而影响检测结果。此，在抗体标记和样品检测过程中应避免使用高浓度盐溶液。研究所生产的CGMMV磁性免疫色谱试纸可以检测和纯化高达0.1μg/ mL的病毒，患病叶子的汁液可以稀释10，000倍（W / V）。测灵敏度与胶体金试纸相当。能有效避免植物叶绿素对检测结果的影响，具有检测速度快，灵敏度高，特异性强的优点。也可以用于病毒的现场调查和流行病学监测。
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据中国农业部发布的《 2012年中国植物检疫分布管理区域清单》，辽宁，上海，江苏，浙江，安徽，湖北，湖南，广东，广西[3]，海南等十个省（区，市）的59个县（市，区）都有CGMMV分布。现场对CGMMV进行早期诊断和检测，并采取有效的检疫措施可以预防疾病的传播[45]。前，CMGMV快速检测方法主要是金免疫色谱分析（GICA），可在15分钟内提供测试结果。体金免疫色谱法使用胶体金标记特定的检测抗体，胶体金染色用于肉眼识别检测结果，但植物叶绿素有时会干扰在确定黄金的结果。性纳米粒子是一种新型的纳米材料，其核心由超顺磁性Fe3O4或铁磁性γ-Fe2O3组成。顺磁性纳米材料可以在外部磁场的作用下迅速聚集，并且在没有磁场的情况下可以均匀分散，表面上功能化的磁性纳米材料可以用于纯化蛋白质等生物大分子。DNA和RNA以及细胞病原微生物的分离和检测[6]，例如，针对人类免疫缺陷病毒的抗体的检测，表面抗原的定量检测。类乙型肝炎和农药的测定[79]。种磁性纳米材料是棕色的，具有可用于检测的磁性信号。
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