桂花内生枯草芽孢杆菌B10抗菌活性物质的稳定性研究

　　摘要：为阐明抗菌活性物质枯草芽孢杆菌B10的稳定性，采用板对板培养方法研究了温度，紫外线，蛋白酶和pH对其活性的影响。
　　果表明，高温和过量的酸碱对其抗菌活性有一定影响，蛋白酶和紫外线辐射对其生物防治活性无明显影响。草芽孢杆菌抗菌活性桂花花霞，张耀武，刘玉峰（天津农业生物技术研究中心，天津300192）摘要：枯草芽孢杆菌B10拮抗物质在温度下的稳定性，研究了紫外线，蛋白酶和pH值的面部培养方法，结果表明，无菌过滤的抗菌活性是在高温和pH值过高的条件下进行的，而不是通过蛋白酶和紫外线来进行的。
　　键：枯草芽孢杆菌；抗生素活性黄瓜枯草芽孢杆菌在植物病害生物防治中的作用日益受到关注[1-4]。不仅对白粉病，灰霉病，霉菌和煤等植物的叶和果实的多种病害都有良好的防治效果。
　　[5-9]，它还具有多种土壤传播的疾病，如枯萎，根腐病等也起一定的抑制作用[10-12]。草芽孢杆菌的生物控制机制主要包括竞争，诱导抗性，生长刺激和拮抗作用[13]。
　　抗作用一直是研究的热点，所产生的抗菌活性物质主要包括脂肽抗生素和蛋白质抗菌活性物质[10]。者从桂花植物中分离出一种内源枯草芽孢杆菌B10，该菌株对早期番茄枯萎病镰刀菌f的拮抗作用。
　　该试验中，以番茄晚疫病的病原真菌为目标菌株，研究了枯草芽孢杆菌分泌的抗菌活性物质的稳定性，为其后续应用提供技术支持。得抗菌活性成分的材料和方法将枯草芽孢杆菌B10接种到LB培养基中，在30°C，150 rpm下培养24小时，并在6000 g离心10分钟以收集细菌。

　　清液，将其通过0.22μm微孔滤器过滤。过滤后，将无菌的过滤溶液放入4℃的冰箱中，以备后用。抗性疫霉菌的抗菌活性物质的拮抗作用是通过对抗法的培养来实现的。PDA培养基上接种致病疫霉，并在黑暗中于25°C孵育5天，然后用Ф= 4.5 mm的打孔机打孔菌落边缘菌丝，以备将来使用。PDA介质倒入陪替氏培养皿Ф= 90 mm，在陪替氏培养皿边缘上放一块滤纸Ф= 4.5 mm，在那张滤纸上放置5μL无菌过滤溶液并接种在培养皿中间放置一个Ф= 4.5 mm的蘑菇将蚕丝片在25°C的黑暗环境中生长5天，测量真菌半径并计算抑菌率。每个处理设定为重复3次，并且将测试重复3次。菌率=（白色对照蘑菇半径-处理过的蘑菇半径）/白色对照蘑菇半径×100％温度对抗菌活性物质的影响将10 ml无菌过滤溶液放入试管中，并将其放置在在40、60、80、100的试验中，在水浴中于℃测30分钟的抑菌活性。每个处理设定为重复3次，并且将测试重复3次。外线对活性抗菌物质的影响。无菌过滤器溶液放置在开盒培养皿中，离紫外线灯20 cm，分别照射5、10、15、20、25和30分钟。每个处理设定为重复3次，并且将测试重复3次。白酶对抗菌活性物质的作用：在试管中取10 ml无菌过滤溶液，加入木瓜蛋白酶，蛋白酶K，胃蛋白酶和胰蛋白酶，终浓度为1 mgmL-如图1所示，并在37℃的水浴中反应2小时。过成对培养的方法确定抑菌活性。每个处理设定为重复3次，并且将测试重复3次。和碱对活性抗菌物质的影响：将10毫升无菌过滤器溶液装在三角瓶中，将pH值调节至1，3，5，5，7，9，11，11，13静置30分钟，然后将pH调节至7，使用相反的培养方法测量抑菌活性。每个处理设定为重复3次，并且将测试重复3次。据分析和统计方法采用方差单向分析和F检验，桂花树价格温度对抗菌活性物质的影响进行分析。示培养方法的测定表明，低温处理对无菌枯草芽孢杆菌B10滤过溶液抑制茄形假单胞菌髓鞘伸长的作用不明显，但如温度升高，效果显着，枯草芽孢杆菌B10的抗菌活性对茄尼菌的菌丝体生长的抑制作用在100℃处理30分钟后几乎完全消失（表1）。）。外线对抗菌活性物质的影响茄根菌菌丝体的生长抑制作用的测量结果表明，紫外线对抗菌活性物质枯草芽孢杆菌B10的抗菌活性的影响不明显。在差异，但均未达到显着水平（表2）。白酶对抗菌活性物质的影响采用成对培养的方法测量了木瓜蛋白酶，蛋白酶K，胃蛋白酶和胰蛋白酶对枯草芽孢杆菌B10抗菌活性物质的影响。一些影响，但这种影响尚未达到显着水平（表3）。和碱对抗菌活性物质的影响在酸性和碱性处理条件下，测定了枯草芽孢杆菌B10抗菌活性物质的抑菌能力。

　　果表明，枯草芽孢杆菌B10的抗菌活性物质随pH值的升高或降低而增加。少，当在非常高的pH（9、11、13）或非常低的pH（1、3）下将无菌过滤器溶液处理30分钟时，枯草芽孢杆菌B10抗菌活性物质的抗菌活性受到显着影响（表4）。论对人类和动物以及非目标生物安全，环保，对药物的抵抗力差，易于保护生物多样性并被广泛购买的微生物农药的益处[14-15]。是，在施用过程中，它对土壤环境（温度，湿度，pH值等），气候条件，天然微生物和农作物生长条件敏感，因此无法在植物根际定植或产生它。菌活性物质被降解，影响其生物防治效果。实验中，作者阐明了影响抗菌活性物质枯草芽孢杆菌B10稳定性的因素，并为其在生产中的应用奠定了理论基础。
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