接种培养技术鉴定玉米叶斑病抗性的探讨
时间：2020/1/6 6:29:56 浏览量：
［目的］研究不同谷类培养基配方和培养条件对桂花孢子生产的影响，为大面积桂花抗病性鉴定提供保证。［方法］以野生桂花HX5株为试验材料，探索18种植物组织培养基，9种温度梯度，9种培养期，7种高，低诱导温度和5种不同的照明条件。生孢子的产生对叶斑真菌的影响。[结果]培养基成分的组合在桂花分生孢子的产生中起着决定性作用，高粱粒的配方100 g +桂花叶15 g + MgSO4 0.2 g + Na3PO4 0， 2 g产生的孢子最多，为16.8×104个细胞/ g。24℃培养时产生的最大孢子；在35和20℃的黑暗条件下，最大孢子产生为35 d; 35℃高温和4℃低温诱导桂花的产生。子的体积有一定的促进作用，但高温和低温诱导后产生的某些分生孢子的一端与分生孢子相连。黑暗和黑暗中交替光照12小时，光照强度为2000勒克斯。4.6×105片/克[结论]高粱粒100克+桂花叶15克+硫酸镁0.2克+ Na3PO4 0.2克是桂花生产孢子的最佳培养基。种环境可以极大地促进细菌繁殖分生孢子。24℃，光照强度为2000的条件下，在12h的明暗交替下，细菌芽孢的产生最高;细菌在35天内生长，生长时间与孢子的产生成正比。35℃高温和4℃低温下感应产生一定的孢子。销效果。[研究的重点]玉米叶枯病（SCLB）是世界上主要的桂花产区的重要病害（Chen Lifeng，2002），它是世界上主要的桂花病害地区。国湿热的桂花的生产（Zhao Juying et al。2010），它可以发生在桂花整个生长期中，而高峰期是在抽水后的。1960年代以来，随着易感桂花杂种在中国的普及和应用，桂花叶斑病造成的破坏越来越严重。感品种可以在头几年将产量降低10％以上，而在严峻年份则可以降低20％至30％。先利，2010）。此，选择抗病的近交系和杂种是控制桂花的最经济有效的措施（李红莲和徐静有，2001;董怀玉等，2005;艾唐顺等，2018 ）。选择和使用抗病品种的过程中，确定对桂花病的抗性是一项常规任务。用的方法是将培养的接种物植入桂花铃铛的口中，或使用病原体的孢子悬浮液制成桂花植物。雾。此，在该领域中需要大量的接种物来进行抗病性鉴定的接种。得具有大量分生孢子或大量分生孢子的接种物是成功接种和鉴定对桂花病的抗性的基本条件。[前人的研究进展]在营养和培养的不同环境条件下，病原体分生孢子产生的效果有显着差异。颖等。（2003）使用燕麦，桂花，查理，彼得，PDA和PDA +，PDA + VB1和其他固体培养基的寄主叶片栽培桂花C.结果表明，两种培养基中PDA + VB1和PDA +的寄主叶片的生长速率，孢子产量和致病性均显着高于其他培养基。红辉（2010）研究了不同培养温度，不同培养pH和营养条件对桂花菌丝体生长和孢子产生的影响，结果表明栽培菌丝的生长速率以PDA + VB1为固体培养基，在30℃时产孢量最高，桂花树价格菌丝生长迅速，产孢量显着。25℃下培养，萌芽孢子的萌发速度最快。额最大。立民（2012）使用了不同的保护方法来测量孢子的产生，菌丝的生长速率以及对菌株的致病性的影响。果表明，贮藏桂花菌株时，以大麦为固体培养基，湿度约10％，在5℃的冰箱中短期（1个月）或长时间保存。（7个月），菌丝体生长速度和孢子产量均最好，均优于桂花培养基和小麦培养基，且菌株的致病性得到较好的维持。玉丽等。（2016）研究了福建省建'，沙县和福州地区的三株桂花菌株，并研究了其上的温度，湿度，pH，光和营养。丝生长，孢子产生和孢子萌发。果表明，菌丝生长的最佳温度和pH为30℃，pH为6，产孢的最佳温度和pH为25℃，pH为6〜7，温度和pH为最适合孢子萌发的条件是在25到28℃和pH值为6的条件下，光照可以明显抑制孢子的产生。85％和95％的相对湿度下或在水琼脂培养基的表面上，孢子的发芽率分别为50％，88％和90％；葡萄糖，乳糖，甘露醇酒精和可溶性淀粉适合菌丝体生长和孢子产生，而尿素，硫酸铵，硝酸铵和氯化铵可以抑制明显的菌丝生长，孢子产生和孢子萌发；菌丝的致死温度为65℃10分钟或60℃为30分钟，分生孢子的致死温度为60℃10分钟或55℃为30分钟。子，致死菌丝体温度和三种菌株的致病性。高粱籽粒为主要原料制备的固体培养基是目前桂花繁殖的常用培养基（王小明等，2010）。胜泽等。（2017年）使用了除高粱粒以外的其他固体介质进行孢子形成测试。果发现，产生最多孢子的培养条件是桂花的葡萄糖琼脂培养基，碳源是乳糖，培养温度是25℃，pH 8。光强度为6000勒克斯，光照条件与明暗交替12小时。
外，已经发现向培养基中添加KNO 3可以显着增加孢子的产生。秀娟等。（2018）发明了“一种产桂花燃烧真菌孢子及其制备方法和应用方法”的专利。方法使用马铃薯，甘露醇，琼脂粉和水作为固体培养基来测试孢子的产生。子的体积是等效PDA介质的1.2至3.6倍。[本研究的切入点]当以前的人接种桂花的叶斑时，接种物的扩散通常使用固体培养基进行培养，其操作过程体重很重，不能直接使用病原菌进行接种；同时，已发展出对该病的大规模耐药性。识别的工作量很大，手术过程中准备的接种物通常具有污染水平高，小昆虫生长，准备和生产缓慢的缺点。满意的孢子。前，关于桂花栽培和利用谷物环境产生孢子的因素的报道很少。
[要解决的主要问题]以高粱，小麦和桂花为主要原料，桂花叶，甘露醇（C6H14O6），碳酸钾（K2CO2），硫酸盐镁（MgSO4）和磷酸钠（Na3PO4）用作成分。18种培养基的单一因子组合用作测试培养基，而影响桂花孢子产生的因子，例如诱导培养时间，温度，讨论了光照，高温和低温。粒的平均配方及其栽培方法保证了桂花抗病性鉴定的简化，时效性和准确性。1.1在广西农业职业技术学院作物研究所的桂花试验现场，从桂花敏感株中采集并分离了桂花野生型HX5试验株。过常规方法分离和培养致病细菌，并通过单个细胞纯化。据科赫的规则，检查细菌并最终获得纯化的菌株（方中达，1998）。1.2试验培养基主要由桂花籽粒，小麦籽粒和高粱籽粒，桂花叶，C6H14O6，K2CO2，MgSO4，Na3PO4等组成。为成分，将18种类型的培养基的单因素组合作为测试培养基（表1）。
产方法的步骤：（1）选择相同大小且无寄生虫的桂花籽粒，小麦籽粒和高粱籽粒。（2）将桂花籽粒浸泡12-15小时，高温煮沸1小时，煮沸沥干备用。小麦粒浸泡20分钟，在高温下煮沸15分钟，洗净沥干备用。温煮25分钟，洗净沥干备用。桂花切成约1平方厘米的大小，以备后用。（3）按配方称量原料，并仔细混合。（4）用300 ml锥形瓶分开组装的培养基，每份100 g。（5）将121Pa下制备的培养瓶高压灭菌45分钟。2.1培养基对孢子产生的影响测试培养基是18种类型培养基的单因子组合，每种培养基均经过配制以进行处理，并重复3次。测试的细菌在培养皿（直径9 cm）中的葡萄糖琼脂培养基（PDA）上繁殖。丝体充满培养皿后，将含有菌丝体的培养基用镊子切成小块。种子平均接种在两种测试培养基中（下同）。接种并摇动的培养瓶置于完全黑暗的24常数恒温人工气候箱中11天，并确定孢子产生。
2.2培养温度对孢子产生的影响测试培养基为7号培养基（100克高粱粒+ 15克桂花叶+硫酸镁0.2克+磷酸三钠0.2克），具有9个温度梯度（12、16、20、24、26、28、32、36和40℃），在黑暗中生长11天（Liu Jing等，2014），重复3次。子A和因子B中的任何一种：因子A是接种后的培养瓶，每次接种后孵育11天以确定孢子的产生；因子A是接种后的培养瓶。子B是接种后在黑暗中26℃的培养瓶中。在第d天，将菌丝体充满培养基并转移到不同温度下继续培养，6天后，产生孢子a。测量。2.3培养时间对孢子产生的影响测试培养基为7号培养基。接种的培养瓶置于20和24℃黑暗的培养箱中，按顺序培养。5、7、9和5。11、15、20、25、30和35天的9个培养阶段中测量孢子的产生，并重复3次。2.4高温和低温诱导对孢子产生的影响测试培养基为7号培养基。接种的培养瓶置于26°C的完全黑暗中，培养5天。高温和低温下进行诱导处理，处理后，在24℃下置于黑暗中，诱导时间后总共继续培养11天。并测量孢子产生。置7种处理方法：4℃12 h，4℃24 h，4℃48 h，35℃12 h，35℃24 h，35℃48 h并进行对照（在26℃孵育5天，然后直接转移至24黑暗中连续6天）（张立杰等，2015），重复3次。2.5光对孢子产生的影响测试介质为n°7培养基，设置5种不同的光处理：24小时的光（3000 lx光强度），12小时的光（ 3种不同的光强度梯度（1500、2000和3000 lx）在黑暗中12 h和黑暗24 h中，细菌在不同光照条件下于24℃孵育11天（Feng Shengze et al。2017）。于每次处理，随机取2 g带有感染性细菌的接种物，将其放入50 ml的烧杯中，并添加10 ml的无菌水。了确保接种物与感染细菌产生的分生孢子从水中掉出，请使用实心的汤匙连续搅拌约100次，然后用纱布过滤器获得桂花孢子的悬浮液。过血细胞计数法确定孢子悬浮液的浓度，并计算孢子的产生。个培养瓶取样3次，每个样品读数3次。较平均值以进行比较。集测试数据并使用Excel 2007和DPS 7.55进行分析。图1中可以看出，除了17号，16号和5号的细胞产量低于1号（CK）的细胞产量外，其他培养基的细胞产量均显着高于CK（P <0.05，下同），其中中等n°7（高粱粒100克+桂花叶15克+ MgSO 4 0.2克+ Na3PO4 0.2克）的比率最高孢子产量为16.8×104 / g； 9号培养基（100克桂花+ 15克桂花叶）+ MgSO4 0.2 g + Na3PO4 0.2 g），其孢子产量为10.8×104 /克;其次是13、11、14、2、6、3、4、8、15、18、12和10中；常用的高粱培养基（CK）的孢子产量为6.8×103 / g，培养基17的孢子产量与CK相当，差异不显着（P> 0 ，05，下同），而＃5培养基的16和孢子产量显着低于CK，分别为2.2×103和5.4×102细胞/ g。们可以看到，在7号培养基上种植时，桂花的孢子产量最高。图2中可以看出，不同的培养温度对桂花孢子的产量有显着影响。fragrans，过高或过低均不利于桂花分生孢子的产生。中，一个因素主要集中在20〜26℃。子是在24℃时产生的最高孢子，并且比其他热处理≤12℃或≥32℃的孢子多得多；因子B可以在12至40℃到26℃产生分生孢子，孢子产生明显高于其他温度处理，随后在24℃产生孢子。们可以看到，桂花叶斑分生孢子生产的最佳温度为24℃。好的方法是将接种的培养瓶直接置于24℃进行培养。图3中可以看出，培养时间对桂花的孢子产生具有显着影响。花在20℃下生长11天以开始产生孢子，而在11到35天中，随着培养时间的增加，孢子的产量显着增加。24℃下生长9天开始产孢，在9天后〜35天，随着培养时间的延长，产孢量显着增加。以看出，在黑暗中于20和24℃下生长时，培养时间与孢子产量成正比，在连续培养35天中孢子产量最高。图4中可以看出，在4℃下处理24小时的孢子产量显着高于其他处理，为4.2×105 pcs / g。次是35℃24 h的热冲击效果，孢子得率为3.5×105 pcs / g; 35℃下48h的热冲击孢子的产生和4℃下12h的冻结的产生与35℃下热处理24h的产生相等，差异不显着。度在4℃下为48 h，在35℃下为12 h，持续12 h。孢率与对照无明显差异。试验还表明，在高温和低温下感应产生的分生孢子的一端与分生孢子杆相连。图5中可以看出，适量的光可以促进桂花的孢子形成，并且太暗或太亮都不利于病原体的孢子形成。中，高强度光，即连续发光24 h，对孢子的产生最有害，孢子的产生仅为1.4×105个/克; 24小时连续黑暗也不利于孢子的产生，孢子的产量为1.9×105片/克；光照12 h（光照强度2000 lx）在黑暗条件下12 h的孢子产量最高，为4.6×105 / g；光照12 h（光照强度1500 lx）在黑暗条件下12 h，然后是3.3×105细胞/ g；光照12 h（光照强度3000 lx）黑暗12 h会抑制病菌分生孢子的分生孢子产生，孢子产量为2.5×105细胞/ g。忠达（1998）认为培养基是影响孢子产生的最重要因素，促进分生孢子产生的最重要方法是使用不同的培养基或改变培养基的组成。化刘丽丽等。（2014）认为，培养基的差异会很明显。响大多数链格孢菌的孢子产生。此，前人进行了许多研究，以促进培养基产生孢子的产生。义清等的研究。
（2008年）表明，促进尖孢镰刀菌摇瓶生产孢子的最佳培养基是绿豆汤培养液，其孢子产生量为1×106细胞/ ml在适当条件下；赵虹（2012）发现苹果腐烂真菌可以在用蜂蜜水和蛋白p去壳的大麦上产生大量的孢子。承忠等。（2013）认为胡萝卜培养基是最有利于辣椒疫霉产生的孢子囊的培养基。研究通过18种谷物培养基对桂花的孢子产量进行了研究，结果表明，产量最高的培养基是100 g高粱粒+ 15 g的桂花叶+硫酸镁0.2 g + Na3PO4 0.2 g的7号培养基，其孢子产量为16.8×104 / g，其后是桂花配方100 g +桂花15克+硫酸镁0.2克+ Na3PO4 0.2克，孢子产量为10.8×104个细胞/克，这表明平均配方7和9适合生产桂花的孢子。小梅等的研究。（2007）表明，桂花孢子形成的最适温度为20-30℃，最适温度为26℃，低于5℃或更高不能产生孢子。35℃；戴玉丽等。
究发现，当温度低于12℃或高于32℃时，桂花病菌丝体生长缓慢，不能产生孢子。病性孢子菌丝体在16-28℃快速生长，可产生孢子。20-26℃时病原菌的孢子产量快速增加，在24℃时孢子产量最高;将长菌丝的培养基转移至不同温度进行连续培养，并可能产生孢子，最高孢子产量在26℃，其次是24℃。表明桂花的菌丝体生长温度高于分生孢子的生产温度。旦形成菌丝，它就会在较高和较低的温度下产生分生孢子。界范围内生产桂花的重要原因。项研究发现培养时间对桂花孢子的产生有重要影响。7号培养基上，在黑暗中20和24°C下病原体孢子的产生与培养时间成正比。
原体连续培养35天。生最高的孢子。花是在其余制剂上培养的，培养时间是否与孢子的产量成正比仍有待研究。外，在该研究中，发现培养35天后，容易繁殖各种细菌，因此不能继续培养。是否与过度的生长时间或生长环境等因素有关，需要进一步探讨。项研究表明，在35℃的高温和4℃的低温下诱导可促进桂花的孢子产生，但在高温和低温下诱导后产生的分生孢子的一端与分生孢子杆相连。
等分尚需确定孢子的活性是否起作用。外，适量的光可以促进桂花的孢子形成，并且太暗或太亮不利于病原体的孢子形成。n°7培养基在光照12 h和交替黑暗12 h时产生的孢子最高，其光强度为2000 lux，这与以前的研究结果不同，前者的研究结果是能量光可以显着抑制孢子的产生（Chen Lifeng，2002）。试验证。花孢子的组织培养基的最佳配方是高粱粒100克+桂花叶15克+硫酸镁0.2克+ Na3PO4 0.2克。种培养基可以显着促进病原体产生分生孢子。24℃的培养基上，光强度为2000lux，明暗交替各12h。子产量最高；细菌在35天内生长，生长时间与孢子的产生成正比。高温35℃和4℃低温下诱导分生孢子在一定程度上有利于细菌芽孢的产生。诱导后分生孢子的形态发生了变化。
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外，已经发现向培养基中添加KNO 3可以显着增加孢子的产生。秀娟等。（2018）发明了“一种产桂花燃烧真菌孢子及其制备方法和应用方法”的专利。方法使用马铃薯，甘露醇，琼脂粉和水作为固体培养基来测试孢子的产生。子的体积是等效PDA介质的1.2至3.6倍。[本研究的切入点]当以前的人接种桂花的叶斑时，接种物的扩散通常使用固体培养基进行培养，其操作过程体重很重，不能直接使用病原菌进行接种；同时，已发展出对该病的大规模耐药性。识别的工作量很大，手术过程中准备的接种物通常具有污染水平高，小昆虫生长，准备和生产缓慢的缺点。满意的孢子。前，关于桂花栽培和利用谷物环境产生孢子的因素的报道很少。
[要解决的主要问题]以高粱，小麦和桂花为主要原料，桂花叶，甘露醇（C6H14O6），碳酸钾（K2CO2），硫酸盐镁（MgSO4）和磷酸钠（Na3PO4）用作成分。18种培养基的单一因子组合用作测试培养基，而影响桂花孢子产生的因子，例如诱导培养时间，温度，讨论了光照，高温和低温。粒的平均配方及其栽培方法保证了桂花抗病性鉴定的简化，时效性和准确性。1.1在广西农业职业技术学院作物研究所的桂花试验现场，从桂花敏感株中采集并分离了桂花野生型HX5试验株。过常规方法分离和培养致病细菌，并通过单个细胞纯化。据科赫的规则，检查细菌并最终获得纯化的菌株（方中达，1998）。1.2试验培养基主要由桂花籽粒，小麦籽粒和高粱籽粒，桂花叶，C6H14O6，K2CO2，MgSO4，Na3PO4等组成。为成分，将18种类型的培养基的单因素组合作为测试培养基（表1）。
产方法的步骤：（1）选择相同大小且无寄生虫的桂花籽粒，小麦籽粒和高粱籽粒。（2）将桂花籽粒浸泡12-15小时，高温煮沸1小时，煮沸沥干备用。小麦粒浸泡20分钟，在高温下煮沸15分钟，洗净沥干备用。温煮25分钟，洗净沥干备用。桂花切成约1平方厘米的大小，以备后用。（3）按配方称量原料，并仔细混合。（4）用300 ml锥形瓶分开组装的培养基，每份100 g。（5）将121Pa下制备的培养瓶高压灭菌45分钟。2.1培养基对孢子产生的影响测试培养基是18种类型培养基的单因子组合，每种培养基均经过配制以进行处理，并重复3次。测试的细菌在培养皿（直径9 cm）中的葡萄糖琼脂培养基（PDA）上繁殖。丝体充满培养皿后，将含有菌丝体的培养基用镊子切成小块。种子平均接种在两种测试培养基中（下同）。接种并摇动的培养瓶置于完全黑暗的24常数恒温人工气候箱中11天，并确定孢子产生。
2.2培养温度对孢子产生的影响测试培养基为7号培养基（100克高粱粒+ 15克桂花叶+硫酸镁0.2克+磷酸三钠0.2克），具有9个温度梯度（12、16、20、24、26、28、32、36和40℃），在黑暗中生长11天（Liu Jing等，2014），重复3次。子A和因子B中的任何一种：因子A是接种后的培养瓶，每次接种后孵育11天以确定孢子的产生；因子A是接种后的培养瓶。子B是接种后在黑暗中26℃的培养瓶中。在第d天，将菌丝体充满培养基并转移到不同温度下继续培养，6天后，产生孢子a。测量。2.3培养时间对孢子产生的影响测试培养基为7号培养基。接种的培养瓶置于20和24℃黑暗的培养箱中，按顺序培养。5、7、9和5。11、15、20、25、30和35天的9个培养阶段中测量孢子的产生，并重复3次。2.4高温和低温诱导对孢子产生的影响测试培养基为7号培养基。接种的培养瓶置于26°C的完全黑暗中，培养5天。高温和低温下进行诱导处理，处理后，在24℃下置于黑暗中，诱导时间后总共继续培养11天。并测量孢子产生。置7种处理方法：4℃12 h，4℃24 h，4℃48 h，35℃12 h，35℃24 h，35℃48 h并进行对照（在26℃孵育5天，然后直接转移至24黑暗中连续6天）（张立杰等，2015），重复3次。2.5光对孢子产生的影响测试介质为n°7培养基，设置5种不同的光处理：24小时的光（3000 lx光强度），12小时的光（ 3种不同的光强度梯度（1500、2000和3000 lx）在黑暗中12 h和黑暗24 h中，细菌在不同光照条件下于24℃孵育11天（Feng Shengze et al。2017）。于每次处理，随机取2 g带有感染性细菌的接种物，将其放入50 ml的烧杯中，并添加10 ml的无菌水。了确保接种物与感染细菌产生的分生孢子从水中掉出，请使用实心的汤匙连续搅拌约100次，然后用纱布过滤器获得桂花孢子的悬浮液。过血细胞计数法确定孢子悬浮液的浓度，并计算孢子的产生。个培养瓶取样3次，每个样品读数3次。较平均值以进行比较。集测试数据并使用Excel 2007和DPS 7.55进行分析。图1中可以看出，除了17号，16号和5号的细胞产量低于1号（CK）的细胞产量外，其他培养基的细胞产量均显着高于CK（P <0.05，下同），其中中等n°7（高粱粒100克+桂花叶15克+ MgSO 4 0.2克+ Na3PO4 0.2克）的比率最高孢子产量为16.8×104 / g； 9号培养基（100克桂花+ 15克桂花叶）+ MgSO4 0.2 g + Na3PO4 0.2 g），其孢子产量为10.8×104 /克;其次是13、11、14、2、6、3、4、8、15、18、12和10中；常用的高粱培养基（CK）的孢子产量为6.8×103 / g，培养基17的孢子产量与CK相当，差异不显着（P> 0 ，05，下同），而＃5培养基的16和孢子产量显着低于CK，分别为2.2×103和5.4×102细胞/ g。们可以看到，在7号培养基上种植时，桂花的孢子产量最高。图2中可以看出，不同的培养温度对桂花孢子的产量有显着影响。fragrans，过高或过低均不利于桂花分生孢子的产生。中，一个因素主要集中在20〜26℃。子是在24℃时产生的最高孢子，并且比其他热处理≤12℃或≥32℃的孢子多得多；因子B可以在12至40℃到26℃产生分生孢子，孢子产生明显高于其他温度处理，随后在24℃产生孢子。们可以看到，桂花叶斑分生孢子生产的最佳温度为24℃。好的方法是将接种的培养瓶直接置于24℃进行培养。图3中可以看出，培养时间对桂花的孢子产生具有显着影响。花在20℃下生长11天以开始产生孢子，而在11到35天中，随着培养时间的增加，孢子的产量显着增加。24℃下生长9天开始产孢，在9天后〜35天，随着培养时间的延长，产孢量显着增加。以看出，在黑暗中于20和24℃下生长时，培养时间与孢子产量成正比，在连续培养35天中孢子产量最高。图4中可以看出，在4℃下处理24小时的孢子产量显着高于其他处理，为4.2×105 pcs / g。次是35℃24 h的热冲击效果，孢子得率为3.5×105 pcs / g; 35℃下48h的热冲击孢子的产生和4℃下12h的冻结的产生与35℃下热处理24h的产生相等，差异不显着。度在4℃下为48 h，在35℃下为12 h，持续12 h。孢率与对照无明显差异。试验还表明，在高温和低温下感应产生的分生孢子的一端与分生孢子杆相连。图5中可以看出，适量的光可以促进桂花的孢子形成，并且太暗或太亮都不利于病原体的孢子形成。中，高强度光，即连续发光24 h，对孢子的产生最有害，孢子的产生仅为1.4×105个/克; 24小时连续黑暗也不利于孢子的产生，孢子的产量为1.9×105片/克；光照12 h（光照强度2000 lx）在黑暗条件下12 h的孢子产量最高，为4.6×105 / g；光照12 h（光照强度1500 lx）在黑暗条件下12 h，然后是3.3×105细胞/ g；光照12 h（光照强度3000 lx）黑暗12 h会抑制病菌分生孢子的分生孢子产生，孢子产量为2.5×105细胞/ g。忠达（1998）认为培养基是影响孢子产生的最重要因素，促进分生孢子产生的最重要方法是使用不同的培养基或改变培养基的组成。化刘丽丽等。（2014）认为，培养基的差异会很明显。响大多数链格孢菌的孢子产生。此，前人进行了许多研究，以促进培养基产生孢子的产生。义清等的研究。
（2008年）表明，促进尖孢镰刀菌摇瓶生产孢子的最佳培养基是绿豆汤培养液，其孢子产生量为1×106细胞/ ml在适当条件下；赵虹（2012）发现苹果腐烂真菌可以在用蜂蜜水和蛋白p去壳的大麦上产生大量的孢子。承忠等。（2013）认为胡萝卜培养基是最有利于辣椒疫霉产生的孢子囊的培养基。研究通过18种谷物培养基对桂花的孢子产量进行了研究，结果表明，产量最高的培养基是100 g高粱粒+ 15 g的桂花叶+硫酸镁0.2 g + Na3PO4 0.2 g的7号培养基，其孢子产量为16.8×104 / g，其后是桂花配方100 g +桂花15克+硫酸镁0.2克+ Na3PO4 0.2克，孢子产量为10.8×104个细胞/克，这表明平均配方7和9适合生产桂花的孢子。小梅等的研究。（2007）表明，桂花孢子形成的最适温度为20-30℃，最适温度为26℃，低于5℃或更高不能产生孢子。35℃；戴玉丽等。
究发现，当温度低于12℃或高于32℃时，桂花病菌丝体生长缓慢，不能产生孢子。病性孢子菌丝体在16-28℃快速生长，可产生孢子。20-26℃时病原菌的孢子产量快速增加，在24℃时孢子产量最高;将长菌丝的培养基转移至不同温度进行连续培养，并可能产生孢子，最高孢子产量在26℃，其次是24℃。表明桂花的菌丝体生长温度高于分生孢子的生产温度。旦形成菌丝，它就会在较高和较低的温度下产生分生孢子。界范围内生产桂花的重要原因。项研究发现培养时间对桂花孢子的产生有重要影响。7号培养基上，在黑暗中20和24°C下病原体孢子的产生与培养时间成正比。
原体连续培养35天。生最高的孢子。花是在其余制剂上培养的，培养时间是否与孢子的产量成正比仍有待研究。外，在该研究中，发现培养35天后，容易繁殖各种细菌，因此不能继续培养。是否与过度的生长时间或生长环境等因素有关，需要进一步探讨。项研究表明，在35℃的高温和4℃的低温下诱导可促进桂花的孢子产生，但在高温和低温下诱导后产生的分生孢子的一端与分生孢子杆相连。
等分尚需确定孢子的活性是否起作用。外，适量的光可以促进桂花的孢子形成，并且太暗或太亮不利于病原体的孢子形成。n°7培养基在光照12 h和交替黑暗12 h时产生的孢子最高，其光强度为2000 lux，这与以前的研究结果不同，前者的研究结果是能量光可以显着抑制孢子的产生（Chen Lifeng，2002）。试验证。花孢子的组织培养基的最佳配方是高粱粒100克+桂花叶15克+硫酸镁0.2克+ Na3PO4 0.2克。种培养基可以显着促进病原体产生分生孢子。24℃的培养基上，光强度为2000lux，明暗交替各12h。子产量最高；细菌在35天内生长，生长时间与孢子的产生成正比。高温35℃和4℃低温下诱导分生孢子在一定程度上有利于细菌芽孢的产生。诱导后分生孢子的形态发生了变化。
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