大白菜软腐病拮抗细菌的筛选,鉴定及其防治效果

　　为了筛选对轻度桂花软腐病具有更好拮抗作用的生物防治菌株，从作物根际土壤，发酵罐和种子库中获得了六种拮抗菌株ASR-12。实验室使用背板方法。

　　ASR-23，ASR-31，ASR-54，ASR-55，ASR-150。体外叶柄软腐病防治试验中，通过注射接种法获得了具有较强拮抗特性的三种拮抗抗菌菌株ASR-12，ASR-23和ASR-150。48小时控制效果分别达到87.64％和80.90。％和70.79％。
　　室效应试验结果表明，菌株ASR-12，ASR-23和ASR-150的防治效果分别为59.22％，59.21％和55.00％，其中显着高于72％的农用链霉素可湿性粉剂（39.15％），具有良好的应用前景。于形态学，生理学，生物化学和分子鉴定，菌株ASR-12已被鉴定为解淀粉芽孢杆菌。腐病是一种由土壤传播到世界各地的细菌性疾病，主要由果蝇属的果蝇细菌引起。国主要包括腐肉芽孢杆菌亚种。Carotovorum，P。arotovorum亚种。Atroseptica和Dickeya chrysanthemi等[1-2]。些细菌除了损害桂花外，还可以感染重要的经济作物，例如魔芋，胡萝卜，辣椒，西红柿，土豆和马蹄莲[1，3-4]，它们可以产生大量果胶感染宿主酶分解宿主细胞组织的细胞壁并产生异味，引起溃疡和浸渍等症状，可能导致死亡严重时整株植物。前，人们主要结合使用育种品种和化学农药来控制软腐病[5]。中，化学农药起效快，防治效果好，但长期使用不仅会污染环境，还会对病原菌产生抵抗力，降低了药效。化学农药相比，生物防治具有较高的选择性，良好的环境相容性，抗药性和广泛的原料生产优势[6]。着现代农业生产的发展，使用环保和安全的微生物控制植物病害变得越来越重要。了检测对桂花的软腐病具有良好控制作用的拮抗细菌，本实验以培养物的根际土壤，废水池和细菌库为材料，并进行了实验。内叶柄控制测试和温室软腐病。
　　照效果测试还证实，通过形态学，生理生化，16S rDNA和gyrB基因序列分析，鉴定出具有最佳防治效果的拮抗菌株。进一步研究细菌的生物控制机制奠定基础。示细菌是软腐真菌SR-5，它已储存在我们的实验室中。些要筛选的菌株是从实验室的菌株库中提取的。

　　自作物根际的土壤和废水收集在国家和地方联合筛选技术研究中心的温室和发酵罐（昆明安宁市青龙市）中微生物菌株。花'83 -1'（'卢春柏1'）购自云南中乐农业科技有限公司。用链霉素可湿性粉剂的72％购自山东百时农药有限公司。养基是固体LB培养基和液体LB培养基。试验于2018年4月上旬开始调查，仅使用致病菌的对照治疗病情更为严重，疾病指数为74.07;农业链霉素防治指数为45.07，防治效果仅为39.15％。菌剂ASR-12，ASR-23和ASR-150较温和，防治效果明显好于农用链霉素可湿性粉剂的72％，分别达到59.22％，59.21％和59.21％。55.00％（表4）。ASR-12菌株的形态学鉴定结果表明，将ASR-12菌株在37℃恒温箱中的固体LB培养基上培养。
　　养开始时的菌落呈乳白色，更多。圆形，边缘锋利。面干燥且起皱。兰氏染色呈阳性，细胞呈棒状，并产生孢子。ASR-12的生理和生化反应是：在2％，5％，7％和10％的盐浓度下正常生长，在30、40和55°C下正常生长，在5℃下正常生长进行以下测试：氧化氢，明胶液化，淀粉水解，甲基红，VP，吲哚乙酸生产和柠檬酸盐的使用均为阳性，厌氧可选，不分解尿素。些特征与解淀粉芽孢杆菌相似。用DNAMAN软件对ASR-12菌株的测序结果进行了拼接，结果表明16S rDNA和gyrB基因序列的总长度分别为1，441 bp和1，201 bp。接的结果输入到NCBI（https：∥www.ncbi.nlm.nih.gov/）中进行BLAST比较，与解淀粉芽孢杆菌的同源性达到99％。据比对结果选择具有较高同源性的菌株序列，并使用MEGA 7.0软件通过邻接法构建系统发育树。果显示在图4和5中。类分析将ASR-12菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌。年来，软腐病已成为限制桂花等高产作物的主要疾病之一。于化学控制对环境非常有害[13]，它不符合绿色农业的要求，因此筛选和挖掘环境友好的微生物菌株并开发出绿色的微生物。业应用中与植物病害相对应的产品已成为当前研究的热点[14-19]。这项研究中，从根际土壤，发酵罐和温室实验室温室实验室菌株中的1000个菌株中选择了6种对软腐细菌SR-5有强烈拮抗作用的菌株。宁。23和ASR-150均具有抑菌区与菌落直径的直径比大于2.1，并且对软腐细菌具有优异的抑制作用。花叶柄组织内部的对照试验表明，ASR-12，ASR-23和ASR-150可以有效抑制浸没在桂皮组织中的区域的扩展。柄，并且ASR-12的防治效果明显优于ASR-23。类似于ASR-150，并以100μg/ mL的氯霉素处理。间试验表明，ASR-12抗菌处理的软腐病指数降低了43.86个百分点，防治效果（59.22％）明显优于对照组。

　　72％的可湿性链霉素粉末（39.15％）。花软腐病中化学物质和杀生物剂的现场控制少于室内试验，这可能与环境条件有关，例如田间病原菌的浓度和分布，植物区系微生物和温湿度，土壤pH值和水分含量。关。

　　过形态观察，生理生化和分子方法将ASR-12菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌。孢杆菌是几种植物的根际最重要的增殖细菌之一，具有抗逆性高，不伤害人和动物，桂花树价格易于发育的优点。定的生物制剂，在过去的几十年中已广泛用于生物学。控制领域，经常可以报道能更好地控制土壤传播疾病的芽孢杆菌[20-22]。外，桂花的软腐病起病迅速。旦在植物上出现可见的软腐斑，桂花的质量就会在短时间内降低，整个植物也会死亡。研究采用先接种生防菌再接种病原菌的方法，确定拮抗细菌对桂花软腐病的预防作用。于王超等人的48.29％。[9]因此，在农业生产中防止桂花软腐病应采取“以预防为导向并以治疗辅助”的手段，即在生产过程中预先喷洒季节内软腐病高发生物制剂达到预防目的。对于其他生物控制方法以及对土壤传播疾病的预防和控制也具有参考意义。外，Hoda等人的研究结果。[23]表明，三种拮抗细菌Pf2，Bs3和Ra39的组合具有比仅有的三种更好的控制效果。该试验中筛选出的3种拮抗菌株ASR-12，ASR-23和ASR-150在体外和温室试验中均具有良好的防治效果。合效果是否比单独使用更好。一步的研究。
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