玉米芽大小对农杆菌转化的影响

　　以郑58桂花近交系种子为试材，对桂花种子进行灭菌处理。芽后，根据农杆菌的长度，将农杆菌转化桂花的两个大芽和小芽的生长点。测了转化芽的发芽情况和绿色荧光蛋白，并分析了桂花芽的大小对转化的影响。果表明，当桂花种子芽长为0.3-0.5 cm时，可用于农杆菌的转化，有利于桂花种子的感染和转化。花芽的生长和转化芽的再生。花是世界上分布最广的粮食作物，也是中国的重要作物[1，2]。基因桂花是生物技术产业化的重要成果，已在世界范围内得到广泛应用，在中国工业化应用也将是大势所趋。人需要在技术和管理上尽早做好准备[3]，深入研究桂花的遗传转化技术具有重要的现实意义。

　　花是近年来在遗传转化中广泛使用的受体材料。

　　未成熟胚胎及其胚性愈伤组织等受体材料相比，该方法具有简便，转化周期短，转化效率高的优点。材料不受季节和其他优点的限制[4]。杆菌介导的方法是目前广泛使用的植物遗传转化方法。

　　具有成本低，外源基因拷贝数低，外源基因基因表达稳定等特点，最适合大规模转基因技术系统[1]。1991年，Gould等人。[5]感染了A.芽的尖端。

　　花用农杆菌获得转基因植物，桂花树价格为建立农杆菌介导的桂花转化体系奠定了基础。们已经改进了将农杆菌转化为多种形式的方法[6-10]，但是利用桂花的生长点作为受体材料并直接发展为无需组织培养的转化植物可以减少土壤细菌的转化。花基因型对转化的影响。
　　是许多方法所没有的优点。于桂花的大小直接影响分枝从茎尖的分化，因此会影响A的转化。花在桂花的生长点。而，用于桂花芽生长点转化的芽的最佳大小需要进一步研究。
　　该实验中，通过研究桂花芽的大小对转化效果的影响，确定农杆菌转化桂花芽的生长点时确定合适的桂花芽大小将有助于改善农杆菌对桂花芽生长点的转化效率接受材料：将桂花自交系郑58的成熟种子用作转化容器。用的PEGAD载体（ubi + EGFP）是含有河北师范大学提供的改良的绿色荧光蛋白（EGFP）基因的PEGAD载体。35S启动子已被普遍存在的启动子取代（图1）。用的农杆菌菌株为EHA105，由河北农林科学院遗传生理研究所实验室提供。子发芽首先，用无菌水将桂花种子冲洗两次，每次7分钟，用0.1％的HgCl2消毒13分钟，然后用无菌水冲洗5次，每次2分钟。次。已灭菌并清洗过的桂花种子放入带有两层滤纸的高温灭菌培养皿（直径9 cm）中。个培养皿中放入20个桂花种子，加8毫升水，并添加2毫克/毫升浓度的乙酰基。
　　56μL的丁香酮（AS）设置为4次重复，并在23至25°C的温度下在黑暗中培养4至5天。择了两种类型的不同大小的种子芽转换处理。化农杆菌感染液的制备50 ml LB液体培养基+ 50 mg / L卡那霉素+ 40 mg / L利福平+ 0.1 ml农杆菌溶液，28℃，210 r / min培养摇动，当OD600在nm = 0.5时，在5℃和4，000 rpm下离心5分钟，除去上清液，然后加入0.5 ml GSH感染基础溶液（高渗感染基础溶液）将+ 0.1mmol / L AS + 0.1mg / L的Planico F68（在处理前30分钟制备感染溶液）配制为农杆菌感染溶液。化转化处理和检测根据桂花芽的长度定义两种处理。理1和处理2的长度分别为0.3-0.5厘米和0.5-1.0厘米。桂花种子芽从生长点上剥下来，并分成两层。用滤纸制成的培养皿中，在每个培养皿中放入8-9桂花种子，在-18℃下处理20分钟，打开盖子，风干30-50分钟，然后加入2μL农杆菌感染溶液，风干50〜55分钟，向每个培养皿中加入1.5 ml无菌水，塞紧后密封，在黑暗中于室温下孵育3天在23-25℃下孵育4天后，研究发芽情况并检测荧光蛋白。转化的桂花种子的芽移植到ver石中并继续轻耕。化后的桂花的发芽如表1所示。理1的发芽率比处理2的发芽率高24个百分点。
　　理1的再生芽长于处理2。（图2），这表明使用农杆菌转化较小的桂花，一旦转化了生长点，就更容易长出芽并发展成桂花，这表明强大的分化和再生能力。

　　就是说，通过使用较小的芽进行转化，转化后的发芽率更高，这有利于获得更多的植物。化后检测出桂花芽绿色荧光蛋白。据绿色荧光蛋白的表达强度（图3），两种处理之间几乎没有差异，这表明转化的芽中阳性细胞的嵌合程度没有很大差异，并且农杆菌属转化的种子芽的生长点为0.3至1.0厘米。体材料转化为农杆菌的程度没有差异，但是在此基础上，由于处理1转化后可以获得更多的桂花芽，因此获得的阳性芽率为比处理2高出16。分数表明，使用较小的桂花芽转化对获得转基因植物更有利。了桂花芽的大小外，在其他转化的相同条件下，使用长度为0.3至0.5 cm的桂花芽的生长点作为转化受体农杆菌的转化不仅有利于转化后的桂花芽的再生，而且不会影响。要转化相同数量的受体，农杆菌的转化效果就能获得更多的转化植物。转化桂花芽生长点的理想材料。
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